Efeito modulador da progesterona, vitamina D e silibinina em monócitos de gestantes portadoras de pré-eclâmpsia

Resumo

A pré-eclâmpsia (PE) é uma síndrome específica da gravidez, caracterizada por hipertensão arterial e proteinúria, identificadas após a 20a semana de gestação. Essa patologia está associada com hiperuricemia, valores séricos elevados de citocinas inflamatórias, ativação de leucócitos e estresse oxidativo. Cristais de ácido úrico (MSU) e hialurona (HA) podem ativar um complexo intracelular denominado inflamassoma, uma estrutura multi-proteica importante para o processamento e liberação das citocinas inflamatórias interleucina-1 beta (IL-1²) e IL-18. O desbalanço entre citocinas pró- e anti-inflamatórias na PE poderia ser dependente da deficiência de fatores reguladores capazes de modular essa resposta inflamatória como, por exemplo, a vitamina D e a progesterona, ou ainda esse desbalanço poderia ser melhorado através da administração de substâncias com propriedades anti-inflamatórias como a silibinina. O objetivo do trabalho é avaliar o efeito modulador da progesterona, vitamina D e silibinina sobre os inflamassomas NLRP1 e NLRP3 em monócitos de gestantes portadoras de PE e em linhagem celular de monócitos humanos THP-1. Monócitos obtidos do sangue periférico de 20 gestantes com PE e células THP-1 serão cultivados na presença ou ausência de MSU, HA, progesterona, vitamina D ou silibinina por diferentes períodos: a) por 30 min para determinação da fosforilação de NF-ºB e análise da expressão de TLR4, NF-ºB e IºB por meio da técnica de citometria de fluxo, b) por 4h para a expressão gênica de TLR4, MYD88, NFKB1, NLRP1, NLRP3, CASP1, IL1B, IL18, TNF e IL10 em estudo por RT-qPCR e c) por 18h para a determinação da concentração de citocinas por ELISA. Adicionalmente, o cultivo de células THP-1, estimuladas ou não com MSU, HA, progesterona, vitamina D e silibinina por 18h serão utilizadas para avaliação das proteínas NLRP1, NLRP3 e caspase-1 pela técnica de Western Blot. Os resultados serão analisados por meio de testes não-paramétricos com nível de significância de 5%.