Efeitos das alterações relacionadas ao envelhecimento na angiogênese e linfangiogênese no microambiente tumoral

Resumo

Melanoma é o tipo de câncer de pele mais agressivo por apresentar altas taxas de mortalidade e quimiorresistência. A comparação entre a incidência do melanoma e taxas de mortalidade tem demonstrado pior prognóstico relacionado ao aumento da idade. Pacientes jovens e idosos com melanoma demonstraram a existência de uma correlação inversa entre a incidência de mortalidade e a presença de metástase no linfonodo sentinela. As proteínas Wnt5A e HAPLN1 foram demonstradas alteradas no microambiente envelhecido e parecem contribuir para alterações na integridade da matriz extracelular (MEC), podendo influenciar amplamente na progressão metastática, na resistência à terapia e ao pior prognóstico. Este projeto tem como objetivo investigar as alterações da MEC relacionadas ao envelhecimento. Especificamente, os estudos in vitro serão focados no papel das proteínas Wnt5A e HAPLN1 em fibroblastos jovens e idosos, que serão avaliados por meio das alterações no cross-linking do colágeno e da integridade da MEC. Outra importante questão deste trabalho será avaliar se a ativação do processo de angiogênese poderá comprometer os vasos linfáticos, podendo resultar em uma via de disseminação hematogênica. Para isso, serão gerados modelos de pele reconstruída em 3D utilizando células endoteliais dérmicas, fibroblastos jovens e idosos com genes manipulados e células de melanoma. Assim, integridade da MEC será determinada por marcadores específicos (CK10, CK14 e DDR1) e imagens de microscopia (Second Harmonic Generation Microscopy). A quantificação da invasão de células de melanoma será realizada utilizando o software ImageJ. Além disso, também serão avaliados marcadores angiogênicos (VEGF, bFGF) e linfangiogênicos (VEGFC, VEGFD e EGF) por ELISA e por Imunohistoquímica (CD31 e trombospondina-1, respectivamente). Utilizando esta pele reconstruída vascularizada envelhecida, esperamos demonstrar o papel do microambiente envelhecido modulando/prejudicando a formação de tubos capilares, desta forma, modificando o processo de angiogênese e linfangiogênese.