Expressão funcional de AGO2: estudo do papel do 'coração do complexo RISC' no desenvolvimento da retina

Resumo

MicroRNAs (miRNAs) são pequenos RNAs não codificantes (cerca de 20 nucleotídeos) que controla o nível proteico de uma forma pós-transcricional por complementariedade ao RNA mensageiro alvo (RNAm). A ação dos miRNAs depende de mecanismos mediados pelo complexo de silenciamento induzido por RNAs (RISC), e o conhecimento sobre a expressão tanto dos componentes como da ação desse complexo é ainda muito limitado. Nesse contexto, é particularmente interessante o papel da Argonauta 2 (AGO2), uma enzima essencial para o complexo RISC, e que é diretamente envolvida no desenvolvimento pós-natal devido à sua importância na maturação e proliferação celular. Portanto, considerando a falta de estudos descritivos acerca das proteínas relacionadas aos miRNAs, e a relevância de AGO2, os principais objetivos desse presente estudo são: 1) descrever a presença de AGO2 em tipos celulares retinianos específicos tanto no desenvolvimento como na retina adulta; 2) através de técnicas in vivo e in vitro, determinar o papel de AGO2 na progressão do ciclo celular; 3) combinando estratégias de inibição farmacológica e knockdown, determinar o papel de AGO2 na diferenciação de subtipos neuronais específicos. Para isso, será utilizado técnicas de biologia molecular e celular como silenciamento genético através do uso de morfolinos, intervenção farmacológica, análise de imunofluorescência, PCR em tempo real, western blotting, cultura primária e citometria de fluxo. (AU)