Avaliação da neuroproteção mediada pelo estrógeno em modelo celular de tauopatia

Resumo

A Doença de Alzheimer é caracterizada clinicamente pela diminuição da capacidade cognitiva e quadro demencial. O principal fator de risco para esta doença é o envelhecimento, sendo que sua incidência é maior em mulheres. Muitos estudos têm apontado que os estrógenos possuem um papel neuroprotetor em processos neurodegenerativos. Atualmente sabe-se que a formação dos emaranhados neurofibrilares, constituídos principalmente pela proteína tau hiperfosforilada, contribui para a patogenia desta doença. Portanto, estratégias terapêuticas que visem a remoção destes agregados proteicos são desejáveis, como por exemplo, pela modulação da autofagia. O objetivo deste estudo será desenvolver e caracterizar uma linhagem de neuroblastoma que superexpresse a proteína tau humana, buscando agonistas/antagonistas dos receptores de estrógeno que levem à diminuição dos agregados proteicos da proteína tau. Para tanto, será realizada a transfecção de células da linhagem SH-SY5Y com DNA plasmidial que codifiquem a proteína tau humana 0N4R (isoforma com 4 repetições do domínio de ligação com o microtúbulo, mais propensa à hiperfosforilação) ou a tau mutada P301L (isoforma com 4 repetições, relacionada a formas de tauopatia familiar). Após verificar a integração do gene da proteína tau ao DNA da célula, será avaliada a capacidade desta proteína de formar agregados (emaranhados neurofibrilares), quantificando a proteína tau por Western blot (tau total e fosforilada) e analisado sua distribuição citoplasmática por microscopia de fluorescência. Serão realizados ensaios de toxicidade para verificar a sensibilidade destas células à morte celular, detectada por citometria de fluxo (kit Anexina V- PI, caspase 3). Por fim, será feito um screening de uma biblioteca de compostos que agem em receptores nucleares (Nuclear Receptor Directed Library), em especial os hormônios esteroides e análogos, em busca de substâncias que possam reduzir os agregados proteicos e que possivelmente ativem a autofagia. Portanto, a avaliação da regulação dos receptores de estrógeno na citoproteção é importante para delinear novas terapias farmacológicas para demências, como a que ocorre na Doença de Alzheimer. (AU)