Caracterização do papel regulatório da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1) na bioenergética celular de Trypanosoma cruzi

Resumo

O parasito Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas. Os medicamentos existentes são ineficazes e de alta toxicidade. Estudos estruturais e funcionais de diversas proteínas estão em curso e são poderosas ferramentas para a identificação e desenvolvimento de novos alvos quimioterápicos. Um reconhecido alvo molecular no desenvolvimento de quimioterápicos são as proteínas reguladoras das funções mitocondriais. Os íons de cálcio atuam como importantes sinalizadores, tanto de processos vitais como de morte celular na matriz mitocondrial. Embora de extrema importância, os mecanismos regulatórios do transporte de cálcio no T. cruzi ainda são pouco conhecidos. Diversos estudos demonstram a importância dos transportadores moleculares uniporter de cálcio mitocondrial (MCU), dos transportadores responsáveis pela extrusão do Ca2+ da matriz mitocondrial, da proteína transmembranar 1 contendo leucina e domínio EF (Letm1). Embora estudos de gene knockout em células de Drosophila apontam para seu papel no transporte de Ca2+ da matriz mitocondrial por troca com H+, em Trypanosoma brucei a função de Letm1 parece estar associada trocador de íon K+/H+. Em T. cruzi, o papel da proteína Letm1 é ainda desconhecido. No presente projeto visamos estudar a regulação da bioenergética mitocondrial por Letm1 em T. cruzi, avaliando os níveis de Ca2+ mitocondriais, geração de espécies reativas de oxigênio e indução de morte do T. cruzi por apoptose ou autofagia pela diminuição dos níveis de ATP. Para tal estudo, utilizaremos intervenções moleculares no Letm1, como superexpressão, mutações sítio dirigidas usando o sistema CRISPR/Cas9 e silenciamento gênico pela expressão da riboenzima glmS. Além disso, realizaremos a expressão e purificação da proteína Letm1 para reconstrução do sistema transportador em lipossomos. (AU)