Análise molecular e funcional da carcinogênese mamária relacionada à restrição proteica materna.

Resumo

Trabalhos prévios indicam que a restrição proteica materna induz alterações no desenvolvimento das glândulas mamárias e aumenta a susceptibilidade da prole à carcinogênese mamária induzida após três doses de N-metil-N-nitrosurea (MNU) em ratas da linhagem Wistar (resistente). Utilizando-se de ratas da linhagem Sprague-Dawley (suscetível), investigaremos as redes de regulação e vias moleculares alteradas na glândula mamária da prole de ratas submetidas à restrição proteica materna e iniciadas com o carcinógeno MNU, assim como avaliaremos o período de administração do carcinógeno. Fêmeas prenhes serão alimentadas do dia gestacional 0 (DG0) até o dia pós-natal 21 (DPN 21, desmame) com ração normoproteica (grupo DNP, 17% de proteína) ou com ração hipoproteica (grupo DHP, 6% de proteína). Após o desmame, as proles de fêmeas serão alimentadas com dieta comercial até os pontos específicos de eutanásia. Nos DPN 28 ou 35, fêmeas dos grupos DNP e DHP receberão dose única de 50 mg/kg de MNU e parte das fêmeas serão eutanasiadas 24 horas após a aplicação da MNU. Fêmeas dos grupos DNP e DHP serão também acompanhadas até o DPN 250 para avaliação do aparecimento de tumores mamários induzidos pela MNU. O surgimento do primeiro tumor será registrado e as fêmeas com tumor e 2 cm de diâmetro serão eutanasiadas . A latência e número médio de tumores serão comparados entre os grupos DNP e DHP. Nos DPN 29 ou 36, o sangue dos animais será coletado para dosagem de estrógeno, progesterona e IGF-1 pelo método calorimétrico e as glândulas mamárias abdominais serão removidas para análise do desenvolvimento da arvore mamária (medidas dos diâmetros longitudinal e lateral e contagem de estruturas terminais), contagem de proliferação celular, apoptose e expressão do receptor de estrógeno alfa (imunoistoquímica para Ki-67, caspase-3 e receptor de estrógeno alfa), análise de expressão gênica (96 genes por meio da técnica de RT-qPCR), e expressão proteica global (LC-MS/MS). Os genes diferentemente expressos serão utilizados para análises in silico com dados de câncer de mama (BRCA) do banco TCGA. Baseado nos resultados in silico será selecionado um gene alvo para realizar o silenciamento ou superexpressão do mesmo em células mamárias normais (MCF-10A) a fim de analisar a viabilidade, apoptose, migração e invasão dessas células. Ao final do estudo espera-se identificar as redes de regulação e vias moleculares alteradas na glândula mamária da prole de ratas submetidas à restrição proteica materna e iniciadas com o carcinógeno MNU.