Explorando a cromatina de Trypanosoma cruzi: novas perspectivas através da imunoprecipitação lócus-específica

Resumo

A regulação da expressão gênica é crucial para a adaptação e sobrevivência do Trypanosoma cruzi, o agente etiológico doença de Chagas. Especificamente, a regulação pós-transcricional tem sido descrita como fundamental neste processo, uma vez que a transcrição dos genes que codificam as proteínas ocorre de forma policistrônica (PTU), ou seja, vários genes são transcritos em uma única fita de RNA mensageiro (mRNA). Entretanto, mecanismos associados ao status da cromatina e organização do genoma sugerem que exista um mecanismo de regulação em nível transcricional ainda pouco explorado. Apesar das alterações significativas no núcleo e nas regiões de eucromatina e heterocromatina entre as formas de vida, ainda não conseguimos determinar as proteínas (ou o conjunto de) presentes em um determinado locus gênico específico. Assim, pretendemos padronizar técnicas in vitro e in vivo de imunoprecipitação (IP) de cromatina de regiões específicas do genoma de T. cruzi usando a proteína Cas9 morta (dCas9) fusionada a uma tag Flag guiadas, primeiramente, para regiões promotoras do gene spliced leader (SL), como prova de conceito da técnica. Após a padronização da técnica, selecionaremos genes com múltiplas cópias do compartimento core versus genes do compartimento disruptivo para serem analisados. Genes como a MASP, presentes no compartimento disruptivo são menos transcritas e estão em regiões de cromatina compactada. A padronização da técnica aqui proposta nos permitirá identificar proteínas associadas à heterocromatina responsáveis pelo silenciamento da expressão gênica nesses loci.Dessa forma, esperamos contribuir para a compreensão dos fatores envolvidos na manutenção do silenciamento e/ou ativação gênica em T. cruzi além de entender como a organização do genoma contribui neste processo. (AU)