Análise de genes moduladores do fenótipo da forma clássica da deficiência da 21-hidroxilase

• Processo: 08/57616-5
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2009
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Tania Aparecida Sartori Sanchez Bachega
• Beneficiário: Tania Aparecida Sartori Sanchez Bachega
• Instituição Sede: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Doenças genéticas inatas Síndrome adrenogenital Transtornos do desenvolvimento sexual Hiperplasia suprarrenal congênita Fenótipo Polimorfismo genético Fatores de transcrição Mutagênese
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Forma Classica | Gene Cyp21A2 | Gene Cyp3A7 | Gene Nr1I3 | Genitalia Ambigua | Hiperplasia Adrenal Congenita

Resumo

A deficiência da 21-hidroxilase (21-OHD) é uma doença autossômica recessiva que compromete a síntese de Cortisol e/ou aldosterona e é a causa mais freqüente de distúrbio da diferenciação sexual 46,XX. Apresenta uma diversidade fenotípica, a qual é decorrente de mutações no gene CYP21A2. Observa-se forte correlação do comprometimento da atividade enzimática conferida pelo genótipo com a forma de apresentação clínica e com os valores hormonais. Entretanto, esta correlação não é observada com o grau de virilização da genitália externa em mulheres. Variações individuais na sensibilidade periférica aos andrógenos poderiam ser responsáveis por esta diversidade fenotípica. A ação dos andrógenos é mediada pelo receptor de andrógenos (RA) e o seu gene codificador apresenta um trato polimórfico de repetições CAG, que altera a atividade de transativação. Em estudo anterior, observamos uma influência do trato CAG no fenótipo de virilização genital; entretanto, esta associação não ocorreu em todos os casos. Supomos que variações interindividuais no metabolismo da testosterona na vida fetal também poderiam interferir no fenótipo de virilização. O principal citocromo metabolizador de testosterona no fígado fetal é o P4503A7, seu gene (CYP3A7) possui polimorfismos que alteram a sua atividade catalítica. Outro fator genético que poderia contribuir para diferenças na metabolização da testosterona é o fator de transcrição CAR (receptor androstane constitutivo), que se liga ao elemento de resposta do promotor do CYP3A7. O seu gene (NR1I3) também é polimórfico e estes podem modular a atividade de transativação dos P4503A. Não existem dados na literatura sobre a distribuição alélica dos genes CYP3A7 e NR1I3 na população brasileira. Entretanto, a presença e a frequências de polimorfismos nos dois genes supracitados podem apresentar diferenças étnicas importantes. Objetivos: 1) Caracterizar a distribuição alélica dos genes CYP3A7 e NR1I3 na população normal brasileira e nas pacientes com a forma clássica da 21-OHD, 2) Correlacionar as variantes alélicas presentes nos genes envolvidos no metabolismo pré-natal da testosterona com o grau de virilização genital de pacientes com a forma clássica da deficiência da 21-OHD, 3) as variantes alélicas que apresentarem maior correlação com o fenótipo genital serão expressas in vitro para estudos funcionais no metabolismo da testosterona. Casuística: foram colhidas amostras de DNA de 100 mulheres normais e de 106 pacientes com 21-OHD. Metodologia: Amplificaremos as regiões promotoras e exônicas/ intrônicas dos genes CYP3A7 e NR1I3 por PCR com primers específicos, os produtos serão submetidos à reação de sequenciamento direto e submetidos à eletroforese capilar (Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA). No estudo funcional, a mutagênese será realizada pela PCR e seqüências do DNA selvagem e mutante, inseridas no vetor pCW e expressas em E coli; subseqüentemente, as proteínas recombinantes serão submetidas a ensaios enzimáticos com testosterona a fim de se determinar as constantes cinéticas. (AU)

Publicações científicas

(4)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

KAUPERT, L. C.; LEMOS-MARINI, S. H. V.; DE MELLO, M. P.; MOREIRA, R. P.; BRITO, V. N.; JORGE, A. A. L.; LONGUI, C. A.; GUERRA, JR., G.; MENDONCA, B. B.; BACHEGA, T. A.. The effect of fetal androgen metabolism-related gene variants on external genitalia virilization in congenital adrenal hyperplasia. Clinical Genetics, v. 84, n. 5, p. 482-488, NOV 2013. (08/55546-0, 08/57616-5)

KAUPERT, LAURA C.; GOMES, LARISSA G.; BRITO, VINICIUS N.; LEMOS-MARINI, SOFIA H. V.; DE MELLO, MARICILDA P.; LONGUI, CARLOS A.; KOCHI, CRISTIANE; DE CASTRO, MARGARET; GUERRA, JR., GIL; MENDONCA, BERENICE B.; et al. A Single Nucleotide Variant in the Promoter Region of 17 beta-HSD Type 5 Gene Influences External Genitalia Virilization in Females with 21-Hydroxylase Deficiency. Hormone Research in Paediatrics, v. 85, n. 5, p. 333-338, 2016. (14/07878-4, 08/55546-0, 08/57616-5)

HAYASHI, GISELLE; FAURE, CLAUDIA; BRONDI, MARIA FERNANDA; VALLEJOS, CARLA; SOARES, DAIANA; OLIVEIRA, ERICA; BRITO, VINICIUS N.; MENDONCA, BERENICE B.; BACHEGA, TANIA A. S. S.. Determinação de pontos de corte para 17OH-progesterona de acordo com o peso ao nascimento melhora a eficiência da triagem neonatal da hiperplasia adrenal congênita. Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia, v. 55, n. 8, p. 632-637, NOV 2011. (08/57616-5)

GOMES, LARISSA G.; MADUREIRA, GUIOMAR; MENDONCA, BERENICE B.; BACHEGA, TANIA A. S. S.. Mineralocorticoid replacement during infancy for salt wasting congenital adrenal hyperplasia due to 21-hydroxylase deficiency. Clinics, v. 68, n. 2, p. 147-151, 2013. (08/57616-5)