Análise de genes moduladores do fenótipo da forma clássica da deficiência da 21-hidroxilase

Resumo

A deficiência da 21-hidroxilase (21-OHD) é uma doença autossômica recessiva que compromete a síntese de cortisol e aldosterona e, é a causa mais frequente de distúrbio da diferenciação sexual 46.XX. Apresenta uma diversidade fenotípica, decorrente de mutações no gene CYP21A2, e geralmente observa-se forte correlação do genótipo com a forma de apresentação clínica. Entretanto, esta correlação não é observada com o grau de virilização da genitália externa em mulheres. A literatura sugere que variações individuais na sensibilidade periférica aos andrógenos poderiam ser responsáveis por esta diversidade fenotípica genital. Durante meu projeto de iniciação científica (#06/56028-7) identificamos uma influência do trato polimórfico CAG do receptor de andrógenos no fenótipo de virilização genital; entretanto, esta associação não ocorreu em todos os casos. Supomos que variações interinviduais no metabolismo da testosterona na vida fetal também poderiam interferir no fenótipo de virilização. O principal citocromo metabolizador de testosterona no fígado fetal é o P4503A7, seu gene (CYP3A7) possui polimorfismos que podem alterar a sua atividade catalítica. Outro fator genético que poderia contribuir para diferenças na metabolização da testosterona é o fator de transcrição CAR (receptor androstane constitutivo), que se liga ao elemento de resposta do promotor do CYP3A7. O seu gene (NR113) também é polimórfico e estes podem modular a atividade de transativação dos P4503A. Objetivos: 1) caracterizar a distribuição alélica dos genes CYP3A7 e NR1I3 na população normal brasileira e nas pacientes com a forma clássica da 21-OHD; 2) correlacionar as variantes alélicas presentes nos genes envolvidos no metabolismo pré-natal da testosterona com o grau de virilização genital de pacientes com a forma clássica da deficiência da 21-OHD. Casuística: foram colhidas amostras de DNA de 100 mulheres normais e de 106 pacientes com 21-OHD. Metodologia: amplificaremos as regiões promotoras e exônicas/ intrônicas dos genes CYP3A7 e NR1I3 por PCR com primers específicos, os produtos serão submetidos à reação de sequenciamento direto e submetidos à eletroforese capilar. A variante alélica que apresentar maior associação com o fenótipo genital será expressa e avaliada quanto a sua função in vitro. Este trabalho é inédito na literatura, representa a continuidade de minha linha de pesquisa e visa identificar genes que possam atuar na modulação do fenótipo da deficiência da 21-hidroxilase. A identificação destes genes, talvez, no futuro possam ter implicações terapêuticas. (AU)