| Processo: | 14/17696-0 |
| Linha de fomento: | Auxílio à Pesquisa - Publicações científicas - Artigo |
| Vigência: | 01 de outubro de 2014 - 31 de março de 2015 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia Comparada |
| Pesquisador responsável: | John Campbell McNamara |
| Beneficiário: | John Campbell McNamara |
| Instituição-sede: | Faculdade de Filosofia, Ciências e Letras de Ribeirão Preto (FFCLRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Microscopia confocal Citoesqueleto |
Resumo
O acoplamento do hormônio agregador de pigmento vermelho (RPCH) a seu receptor na membrana plasmática de cromatóforos em crustáceos desencadeia cascatas de sinalização de cálcio (Ca2+) e guanosina monofosfato cíclico (GMPc), as quais ativam motores moleculares, culminando na translocação de grânulos pigmentares. Aqui, investigamos a distribuição de microfilamentos e microtúbulos, e sua associação com os motores moleculares miosina e dineína em cromatóforos, por meio de microscopias confocal e eletrônica de transmissão. Avaliamos o papel funcional do citoesqueleto na translocação pigmentar por inibição in vitro da dinâmica de polímeros e da atividade de motores moleculares. Os microtúbulos distribuem-se amplamente ao longo das extensões celulares dos cromatóforos, estejam os grânulos de pigmentos agregados ou dispersos. A inibição da dinâmica de microtúbulos por taxol induz a agregação e inibe a re-dispersão pigmentar. A marcação de actina com faloidina-FITC, aliada à fixação com ácido tânico para análise ultra-estrutural, revelam que os microfilamentos formam uma rede associada aos grânulos pigmentares. A polimerização da actina induzida por jasplaquinolide inibe fortemente a agregação desencadeada por RPCH, causando dispersão espontânea e inibindo a re-dispersão pigmentar. A inibição da polimerização da actina por latrunculina-A bloqueia completamente a agregação e a re-dispersão pigmentar. Por imunocitoquímica confocal, mostramos que a miosina II não-muscular (NMMII) está co-localizada com grânulos de pigmento, e sua inibição por blebistatina reduz fortemente a resposta ao RPCH, além de induzir a dispersão pigmentar espontânea. A miosina II e a dineína também estão co-localizadas com grânulos de pigmento. A inibição da dineína-ATPase por eritro-9-(2-hidroxi-3-nonil) adenina induz agregação espontânea, mas inibe tanto a agregação desencadeada por RPCH quanto a re-dispersão. A agregação e a dispersão dos pigmentos dependem principalmente da integridade funcional dos microfilamentos, embora seja possível que os microtúbulos também participem destes mecanismos. Ambos os polímeros do citoesqueleto somente apresentam plena funcionalidade quando a dinâmica de suas subunidades está ativa. A miosina e a dineína parecem ser os motores moleculares que coordenam a agregação pigmentar. Esses mecanismos de translocação pigmentar em cromatóforos de crustáceos compartilham diversas das características exibidas por células pigmentares de vertebrados. (AU)