| Processo: | 14/25296-2 |
| Modalidade de apoio: | Auxílio à Pesquisa - Regular |
| Data de Início da vigência: | 01 de maio de 2015 |
| Data de Término da vigência: | 30 de abril de 2017 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Parasitologia - Protozoologia de Parasitos |
| Pesquisador responsável: | Renato Arruda Mortara |
| Beneficiário: | Renato Arruda Mortara |
| Instituição Sede: | Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil |
| Município da Instituição Sede: | São Paulo |
| Pesquisadores associados: | Clara Lúcia Barbiéri Mestriner ; Cristina Mary Orikaza Toqueiro ; Fernando Roberto Oliveira Real ; José Franco da Silveira Filho ; Marjorie Mendes Marini e Souza ; Michel Pinkus Rabinovitch |
| Assunto(s): | Leishmania mexicana Análise de sequência de RNA Interações hospedeiro-patógeno Transcrição genética Fibroblastos |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | citoplastos | infeccao | interação parasita-célula hospedeira | Leishmania amazonensis | L929 | RNAseq | Transcriptômica |
Resumo
Células enucleadas, ou citoplastos (cujo núcleo é removido in vitro) são um modelo biológico sem paralelo e pouco explorado no estudo das infecções intracelulares. A enucleação celular, realizada por centrifugação na presença de citocalasina B antes dos ensaios de infecção, interrompe abrupta e completamente a transcrição de genes cromossômicos da célula hospedeira em resposta a patógenos intracelulares. Como resultado, importantes vias de sinalização núcleo-dependentes, como a via do NF-ºB por exemplo, tornam-se inoperantes. A enucleação não exclui, porém, que o patógeno possa afetar o destino dos mensageiros disponíveis, ou sua tradução em proteínas. Portanto, a ausência de transcrição de novo na célula anucleada, permite-nos identificar os transcritos que são alvos do parasita nas primeiras etapas da infecção.Este projeto de pesquisa visa identificar que transcritos remanescentes da célula hospedeira enucleada são preservados e garantem a sobrevivência e multiplicação do parasita intracelular Leishmania amazonensis. Assim estabeleceremos uma rede de interação mínima de proteínas preditas pelos transcritos requeridas para o parasitismo intracelular. Nossa estratégia de pesquisa envolve: i) a infecção de citoplastos, que permitem ao menos dois ciclos de divisão do parasita na ausência de transcrição de novo; ii) sequenciamento dos transcritos dos citoplastos e parasitas por RNA-seq, de modo a identificar quais transcritos do hospedeiro são preservados durante 48 horas de infecção intracelular nestas células sem núcleo; iii) comparar os perfis de transcritos de citoplastos infectados ou não com o parasita com o perfil da célula nucleada (fibroblastos linhagem L clone 929) infectada ou não.Os resultados obtidos, além de identificar os componentes do hospedeiro necessários e suficientes para a infecção intracelular, também podem elucidar se há algum controle, mediado pelo parasita, na manutenção e sobrevida de transcritos dos citoplastos. (AU)
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