Avaliacao do papel dso receptores purinergicos p2x2, p2x4 e p2x7 durante a diferenciacao neuronal in vitro utilizando a superexpressao do a superexpressao dos receptores nas linhagens de celulas p19 e a su

• Processo: 05/54597-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2005
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Alexander Henning Ulrich
• Beneficiário: Katia Kioko Yuahasi
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 01/08827-4 - Modulação artificial da diferenciação neuronal e função de receptores por oligonucleotídeos sintéticos atuantes aos níveis gênico e protéico, AP.JP
• Assunto(s): Diferenciação neuronal Interferência de RNA
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas P19 | Diferenciacao Neuronal | Mutagenese Sitio Dirigida | Receptor Purinergico P2X | Rna De Interferencia

Resumo

A proliferação de progenitores neurais é um dos processos fundamentais de desenvolvimento responsável pela geração do número de células de cada tipo na seqüência correta do cérebro. Para estudar a diferenciação neuronal in vitro podem-se utilizar alguns modelos como células P19 carcinoma embrionário e células tronco embriônicas (ES), que ao serem tratadas com ácido retinóico são capazes de diferenciar em diferentes tipos de células que incluem neurônios, astrócito, por isso constitui um bom modelo in vitro para estudo de diferenciação neuronal. O sistema nervoso central (SNC) possui receptores sensíveis à ATP, que são dois tipos o P2X (receptor ionotrópico) e o P2Y (receptor acoplado à proteína G). Estudos do laboratório demonstraram que a expressão do receptor P2X4 diminui durante a diferenciação neuronal in vitro das células P19, o receptor P2X2 expressão aumenta durante toda diferenciação neuronal. Esse estudo visa investigar a influência da expressão de receptores P2X2, P2X4, e P2X7 recombinantes durante a diferenciação neuronal de células P19 in vitro através da superexpressão, e também a down-regulação da expressão gênica dos receptores através do silenciamento gênico por RNAi. No exemplo do receptor P2X4 será feito uma proteína mutante, a qual a expressão gênica não será afetada pelo RNAi dentro das células. O cDNA codificante do receptor será alterado nas seqüências afetadas pelo RNAi, na qual será alterado a seqüência do DNA, porém não afetando a seqüência protéica baseado no código degenerado de aminoácidos e a expressão do receptor. Assim, será possível usar o receptor P2X4 como controle para o efeito de RNAi. (AU)