Desenvolvimento de uma metodologia que permitira monitorar a clonalidade de celulas transduzidas com vetores lentivirais.

• Processo: 07/56495-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2008
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Bryan Eric Strauss
• Beneficiário: Daniela Bertolini Zanatta
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Leucemia Terapia genética Código de barras Lentivirus
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Codigo De Barras | Lentivirus | Leucemia | Lmo2 | Terapia Genica | X-Scid

Resumo

Os vetores retrovirais estão entre os principais vetores utilizados em protocolos clínicos de terapia gênica, inclusive para o tratamento de doenças monogênicas como SCID-X1, SCID-ADA e doença granulomatosa crônica. Vetores derivados do oncorretrovírus murino da leucemia murina de Moloney (MoMLV) têm sido escolhidos no tratamento dessas doenças. Embora os resultados tenham indicado a possibilidade de tratamento, alguns pacientes submetidos ao protocolo de terapia gênica para SCID-X1, apresentaram um quadro de leucemia atribuído à proliferação clonal causada por metagênese insercional retroviral, somada com uma vantagem proliferativa conferida pelo gene terapêutico. Nos últimos anos, vetores derivados de um outro membro da família Retroviridae, os lentivírus, foram desenvolvidos para aplicação clínica, com a vantagem de que estes vetores possuem a capacidade de transduzir células pós-mitóticas e apresentam um perfil de H integração que parece ser mais seguro do que o MoMLV. Neste projeto, apresentamos uma proposta inovadora que permitirá desenvolver ensaios simples e rápidos para monitorar a clonalidade de populações celulares transduzidas com vetores lentivirais. Assim, pretendemos construir uma biblioteca de vetores contendo uma marcação aleatória, denominada "código de barras", o que permitirá caracterizar a clonalidade de uma população de células transduzidas. Os vetores lentivirais marcados individualmente com o código de barras, serão utilizados para transduzir células alvo, avaliando-se a complexidade populacional através de seqüenciamento. Com o surgimento de seqüências específicas, conseguiremos determinar e até quantificar a tendência de uma proliferação clonal. Esta metodologia será de grande valia para testar novos arranjos de promotores e genes terapêuticos, permitindo desenvolver vetores mais seguros, contribuindo para a redução da probabilidade de um evento de proliferação clonal desencadeado pela metagênese insercional. Com o êxito deste projeto, a tecnologia também poderá ser utilizada para monitorar, in vivo, a clonalidade de populações celulares transduzidas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ZANATTA, DANIELA B.; TSUJITA, MARISTELA; BORELLI, PRIMAVERA; AGUIAR, RODRIGO B.; FERRARI, DANIEL G.; STRAUSS, BRYAN E.. Genetic barcode sequencing for screening altered population dynamics of hematopoietic stem cells transduced with lentivirus. MOLECULAR THERAPY-METHODS & CLINICAL DEVELOPMENT, v. 1, 2014. (09/51386-0, 07/56495-7, 13/25167-5, 14/03205-5)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

ZANATTA, Daniela Bertolini. Sequenciamento de um código de barras como ferramenta para quantificação de alterações na dinâmica de populações celulares transduzidas com vetores lentivirais.. 2012. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.