Sintese, purificacao e caracterizacao da prolactina humana glicosilada produzida em celulas de ovario de hamster chines.

• Processo: 06/52973-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2006
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carlos Roberto Jorge Soares
• Beneficiário: Susana da Rocha Heller
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Glicosilação Prolactina Bioensaio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bioensaio | Cho | Cultura De Celula | Glicosilacao | Prolactina | Prolactina Glicosilada

Resumo

A prolactina humana é um dos hormônios mais versáteis em termos de ação biológica, tendo sido documentados mais de 300 efeitos biológicos diferentes relacionados a esse hormônio. Sua ação mais conhecida está relacionada com o estimulo da lactação e a regulação do crescimento e da diferenciação da glândula mamaria. As duas principais isoformas desse hormônio são a prolactina não glicosilada e a prolactina glicosilada. Este projeto tem como principais metas a otimização da síntese e purificação da prolactina humana a partir de células de ovário de hamster chinês modificadas geneticamente e já obtidas em nosso laboratório. Será enfatizada g obtenção da forma glicosilada, avaliando, fatores que influenciam a sua produção, como meio de cultura, concentração de glicose, pH do meio, presença de inibidores de síntese protéica, entre outros. As formas glicosiladas purificadas serão caracterizadas por métodos físico-químicos e biológicos incluindo comparação com o produto natural. Na caracterização biológica serão realizados estudos de potência comparando o bioensaio clássico Nb2 com um outro, recém desenvolvido no laboratório, utilizando células Ba/F3-LLP, ambos baseados na proliferação celular estimulada pela presença de prolactina. Esse projeto faz parte de um Projeto principal intitulado "Desenvolvimento de bioprocesso para produção em larga escala de hormônios recombinantes e seus antagonistas em cultura de células CHO em biorreatores", em colaboração com o Instituto Butantan, (FAPESP Processo nº 05/60826-3) (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

GOULART, HERBERT RODRIGUES; ARTHUSO, FERNANDA DOS SANTOS; NUCCI CAPONE, MARCOS VINICIUS; DE OLIVEIRA, TAIS LIMA; BARTOLINI, PAOLO; JORGE SOARES, CARLOS ROBERTO. Enhancement of Human Prolactin Synthesis by Sodium Butyrate Addition to Serum-Free CHO Cell Culture. JOURNAL OF BIOMEDICINE AND BIOTECHNOLOGY, 2010. (05/60826-3, 07/54493-7, 07/59709-8, 07/59540-3, 06/52973-9)

HELLER, S. R.; GOULART, H. RODRIGUES; ARTHUSO, F. S.; OLIVEIRA, T. L.; BARTOLINI, P.; SOARES, C. R. J.. Synthesis, purification and characterization of recombinant glycosylated human prolactin (G-hPRL) secreted by cycloheximide-treated CHO cells. Journal of Biotechnology, v. 145, n. 4, p. 334-340, FEB 15 2010. (06/52973-9, 05/60826-3, 07/59709-8, 07/59540-3)

GOULART, HERBERT RODRIGUES; ARTHUSO, FERNANDA DOS SANTOS; NUCCI CAPONE, MARCOS VINICIUS; DE OLIVEIRA, TAIS LIMA; BARTOLINI, PAOLO; JORGE SOARES, CARLOS ROBERTO. Enhancement of Human Prolactin Synthesis by Sodium Butyrate Addition to Serum-Free CHO Cell Culture. JOURNAL OF BIOMEDICINE AND BIOTECHNOLOGY, v. N/A, p. 11-pg., 2010-01-01. (07/59709-8, 07/54493-7, 07/59540-3, 05/60826-3, 06/52973-9)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

HELLER, Susana da Rocha. Utilização de células CHO cultivadas na presença de cicloheximida para obtenção e caracterização de prolactina humana glicosilada (G-hPRL) recombinante. 2008. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN/BT) São Paulo.