Genes de glandulas salivares do carrapato do boi, rhipicephalus microplus, afetados pela resposta imune do hospedeiro: clonagem e expressao para avaliacao do potencial como antigeno vacinal.

• Processo: 07/59357-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2008
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Isabel Kinney Ferreira de Miranda Santos
• Beneficiário: Sandra Regina Costa Maruyama
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Expressão de proteínas Rhipicephalus microplus Imunização
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Antigeno Vacinal | Expressao De Proteinas | Genes De Glandulas Salivares | Imunizacao | Rhipicephalus Microplus

Resumo

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, o carrapato dos bovinos, causa enormes prejuízos à saúde e produção animal. Um estudo bioinformática comparativo dos transcriptomas de glândulas salivares e larvas não alimentadas de R. microplus, obtidos a partir de diferentes situações fisiológicas, revelou genes importantes para a hematofagia, cuja expressão gênica foi afetada pela resposta imune do hospedeiro, portanto, úteis para comporem uma vacina anti-carrapato. A hipótese de trabalho é a de que genes expressos diferencialmente em situações de parasitismo distintas e o padrão de reconhecimento dos produtos destes genes pelos hospedeiros (não reconhecimento pelo hospedeiro suscetível e reconhecimento pelo resistente) podem constituir bons candidatos para compor uma vacina anti-carrapato. Objetivos: 1) confirmar a expressão gênica diferencial dos genes de interesse; 2) clonar e expressar esses genes; 3) avaliar o reconhecimento das proteínas recombinantes (recPs) pelo soro dos hospedeiros; 4) caracterizar a atividade das recPs para elucidar seus papéis na resposta imune do hospedeiro e 5) imunizar de bovinos com as recPs e avaliar proteção através de desafio com R. microplus. Metodologia: RT-PCR quantitativo será utilizado para confirmar a expressão diferencial dos genes alvos. A clonagem e expressão de proteínas serão realizadas em sistema procarioto (E. coli) e eucarioto (levedura), utilizando os vetores pET17b e pYGEX, respectivamente. Western blots de proteínas recombinantes serão realizados para avaliação do reconhecimento pelo soro de hospedeiros infestados. Ensaios in vitro de proliferação celular, migração celular, atividade anti-complemento e atividade anti-hemostática serão realizados com as recPs. Bovinos serão imunizados com recPs, sendo 3 doses em intervalos de 10 dias, no 30° dia serão desafiados com larvas de R. microplus e os parâmetros biológicos dos carrapatos analisados. Os soros dos animais serão coletados antes de cada dose e Western blots e ELISA com as proteínas recombinantes serão realizados para avaliação de reconhecimento dos antígenos e dosagem de anticorpos. (AU)

Publicações científicas

(6)

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARUYAMA, SANDRA R.; ANATRIELLO, ELEN; ANDERSON, JENNIFER M.; RIBEIRO, JOSE M.; BRANDAO, LUCINDA G.; VALENZUELA, JESUS G.; FERREIRA, BEATRIZ R.; GARCIA, GUSTAVO R.; SZABO, MATIAS P. J.; PATEL, SONAL; et al. The expression of genes coding for distinct types of glycine-rich proteins varies according to the biology of three metastriate ticks, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, Rhipicephalus sanguineus and Amblyomma cajennense. BMC Genomics, v. 11, JUN 7 2010. (07/59357-4, 04/09992-7, 06/54041-6)

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MARUYAMA, SANDRA R.; GARCIA, GUSTAVO R.; TEIXEIRA, FELIPE R.; BRANDAO, LUCINDA G.; ANDERSON, JENNIFER M.; RIBEIRO, JOSE M. C.; VALENZUELA, JESUS G.; HORACKOVA, JANA; VERISSIMO, CECLIA J.; KATIKI, LUCIANA M.; et al. Mining a differential sialotranscriptome of Rhipicephalus microplus guides antigen discovery to formulate a vaccine that reduces tick infestations. PARASITES & VECTORS, v. 10, APR 26 2017. (10/16464-8, 12/15464-0, 07/59357-4, 04/09992-7, 06/54041-6, 09/53645-3, 12/04087-0)

RIBEIRO, JOSE MARCOS C.; LABRUNA, MARCELO B.; MANS, BEN J.; MARUYAMA, SANDRA REGINA; FRANCISCHETTI, IVO M. B.; BARIZON, GUSTAVO CANAVACI; DE MIRANDA SANTOS, ISABEL K. F.. The sialotranscriptome of Antricola delacruzi female ticks is compatible with non-hematophagous behavior and an alternative source of food. Insect Biochemistry and Molecular Biology, v. 42, n. 5, p. 332-342, MAY 2012. (09/53645-3, 07/59357-4)

GARCIA, GUSTAVO R.; RIBEIRO, JOSE MARCOS CHAVES; MARUYAMA, SANDRA REGINA; GARDINASSI, LUIZ GUSTAVO; NELSON, KRISTINA; FERREIRA, BEATRIZ R.; ANDRADE, THALES GALDINO; FERREIRA DE MIRANDA SANTOS, ISABEL K.. A transcriptome and proteome of the tick Rhipicephalus microplus shaped by the genetic composition of its hosts and developmental stage. SCIENTIFIC REPORTS, v. 10, n. 1, JUL 30 2020. (13/00382-0, 07/59357-4, 09/51212-2, 04/09992-7, 06/54041-6, 09/53645-3, 12/04087-0)