Identificação de proteínas plasmáticas e de componentes proteicos e lipídicos na parede celular de dois isolados geneticamente distintos de Paracoccidiodes brasiliensis

• Processo: 07/59768-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2008
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rosana Puccia
• Beneficiário: Larissa Valle Guilhen Longo
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Lipídeos Paracoccidioides brasiliensis Parede celular Proteoma
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Analise Diferencial | Lipideos | Paracoccidioides Brasiliensis | Parede Celular | Proteoma

Resumo

O objetivo do projeto atual é detectar proteínas covalentemente ligadas lipídeos de parede celular, expressos comparativamente no Pb3 e Pb18, os quais pertencem a grupos genéticos distintos de Paracoccidioides brasiliensis e suscitam infecções com padrões diversos em camundongos B10.A. A expressão das moléculas será comparada paralelamente em meio suplementado ou desprovido de soro fetal bovino. Moléculas de interesse selecionadas a partir desses dados serão analisadas individualmente em relação à localização, expressão diferencial, atividade biológica, imunológica, possível estudo de biogênese, além de outras que sejam pertinentes. Para tal, será feita a caracterização dos genes, expressão heteróloga das proteínas e obtenção de anticorpos. A partir de resultados preliminares de proteoma diferencial da parede obtido pelo grupo para Pb3 e Pb18, a proteína TSA ("thiol specific anti-oxidant") foi selecionada para análise imediata. As extrações de proteínas covalentemente ligadas serão feitas de acordo com protocolos da literatura. As análises de peptídeos tripticos serão realizadas por espectrometria de massas/cromatografia líquida (MS-LC/LC) e validadas. A fração lipídica será extraída com clorofórmio/metanol e analisada por TLC preliminarmente no laboratório, seguida de cromatografia gasosa/espectrometria de massas (GC-MS) e espectrômetro de massas/ionização por "eletrospray" (ESI-MS). A detecção e análise cromatográfica fina de proteínas e lipídeos resultantes de fracionamentos da parede celular será realizada em colaboração com o Dr. Igor C. Almeida, da Universidade do Texas em El Paso. Para tal, pode ser necessário que a estudante disponha de alguns meses em seu laboratório. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

VALLEJO, MILENE C.; NAKAYASU, ERNESTO S.; LONGO, LARISSA V. G.; GANIKO, LUCIANE; LOPES, FELIPE G.; MATSUO, ALISSON L.; ALMEIDA, IGOR C.; PUCCIA, ROSANA. Lipidomic Analysis of Extracellular Vesicles from the Pathogenic Phase of Paracoccidioides brasiliensis. PLoS One, v. 7, n. 6, p. e39463, 2012. (07/04757-8, 06/05095-6, 07/59768-4)