Vias de transdução de sinal do receptor tipo Toll 4 nas células beta pancreáticas e seus efeitos na secreção e produção de insulina.

• Processo: 09/06547-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Imunologia - Imunologia Celular
• Pesquisador responsável: Anna Carla Renata Krepel Goldberg
• Beneficiário: Fernanda Vieira Paladino
• Instituição Sede: Instituto Israelita de Ensino e Pesquisa Albert Einstein (IIEPAE). Sociedade Beneficente Israelita Brasileira Albert Einstein (SBIBAE). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Apoptose Imunidade inata
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: apoptose | células-beta | produção e secreção de insulina | receptor tipo Toll 4 | Imunidade Inata

Resumo

Ilhotas de Langerhans são compostas de vários tipos celulares, sendo o tipo predominante as células-beta produtoras de insulina. As células-beta são responsivas a citocinas pró-inflamatórias ativando a via do NF-kB que acarreta sua disfunção e morte celular. Para a terapia celular do diabetes com ilhotas pancreáticas humanas, pâncreas de doadores de órgãos em morte encefálica são selecionados e as ilhotas, isoladas e purificadas, infundidas na veia porta dos pacientes. No processo de separação as ilhotas são submetidas a condições de estresse que podem levá-las a expressar moléculas sinalizadoras de perigo, facilmente induzidas pelo ambiente inflamatório e pela conhecida suscetibilidade das células-beta a esse tipo de estímulo. Dentre as moléculas produzidas pelas ilhotas encontram-se IL-1beta, MCP-1, TNF-alfa e receptores tipo Toll (TLR). Dentre estes receptores, o TLR4, que se associa à molécula CD14, transduz a sinalização intracitoplasmática induzida por LPS. Estudos mostram haver expressão de TLR4 em células não-imunes de diversos tecidos e vários fatores indutores que resultam de dano tecidual e isquemia, já foram descritos. Em experimentos prévios, demostramos que TLR4 estava presente em praticamente todas as amostras, na superfície das células-beta e não em macrófagos CD11b positivos. Ao incubar as células-beta isoladas com LPS, observou-se também um aumento dose-dependente do RNAm de TLR4 e de CD14, mas diminuição de RNAm para insulina, além de queda da viabilidade das células-beta. A mesma expressão de TLR4 está presente em células MIN6 originárias de insulinoma de camundongo e são responsivas à ação do LPS, inibindo a transcrição do gene de insulina e com queda da viabilidade celular. Assim, o tema desta proposta é o de caracterizar a função biológica do TLR4 em células beta pancreáticas de camundongo MIN6, verificando quais as vias de sinalização ativadas pelo seu ligante LPS e a sua relação com a indução de morte celular e a secreção de insulina. Para isto devemos: a) analisar as vias de transdução de sinal do receptor TLR4 ativado por LPS, por rastreamento dos componentes da cascata de sinalização; b) medir a produção intracelular e a secreção de insulina, e testar a responsividade em meios contendo concentrações de glicose normais e altas para identificar se há correlação entre hiperglicemia, produção e secreção de insulina e expressão do receptor TLR4, c) analisar o potencial pró-apoptótico da ativação de TLR4 pelo LPS. d) avaliar a ativação da via acoplada ao TLR4 frente a ligantes endógenos selecionados, como heme, ácidos graxos saturados e Hsp60.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

PALADINO, Fernanda Vieira. Vias de transdução de sinal do receptor tipo Toll 4 nas células pancreáticas e seus efeitos na secreção e produção de insulina. 2012. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Faculdade de Medicina (FM/SBD) São Paulo.