Avaliação do comprimento telomérico de indivíduos sadios e portadores de anemia aplástica utilizando o Rotor-Gene Q real-time cycler

• Processo: 12/02822-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2012
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Eduardo Magalhães Rego
• Beneficiário: Felipe Martelli Soares da Silva
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/14247-6 - Center for Research on Cell-Based Therapy, AP.CEPID
• Assunto(s): Hematologia Reação em cadeia da polimerase via transcriptase reversa quantitativa (qRT-PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: comprimento telomérico | PCR quantitativo | Rotor-Gene Q real-time cycler | Hematologia

Resumo

Os telômeros são estruturas ribonucleoprotêicas nas extremidades dos cromossomos lineares que servem para proteger os cromossomos de fusão por recombinação homóloga ou não-homológa e instabilidade. Devido à incapacidade da DNA polimerase de duplicar completamente as extremidades da dupla fita de DNA linear, a simples fita recém-sintetizada é mais curta que a fita molde. Desta forma, os telômeros se encurtam a cada divisão celular mitótica. Para manter o comprimento telomérico, células com alta capacidade proliferativa expressam a telomerase, uma transcriptase reversa que adiciona cataliticamente hexâmeros TTAGGG à extremidade 5 da fita líder to telômero. Entretanto, apesar da expressão da telomerase, células humanas demonstram encurtamento telomérico com a idade. Ademais, demonstramos que mutações nos genes que codificam componentes da telomerase causam encurtamento telomérico aumentado, o que clinicamente pode se traduzir em anemia aplástica (Yamaguchi et al. NEJM 2005), leucemia mielóide aguda (Calado et al. PNAS 2009), fibrose pulmonar idiopática (El-Chemali et al. Chest 2011), cirrose hepática e hiperplasia nodular regenerativa do fígado (Calado et al. PLoS ONE 2009; Calado et al. Hepatology 2011; revisão em Calado & Young NEJM 2009). O objetivo deste projeto é estabelecer um novo método de medição do comprimento telomérico de células humanas usando PCR quantitativo monocrômico em multiplex e determinar a variação do comprimento telomérico com a idade na população brasileira. O método envolve um aprimoramento da técnica de Cawthon (NAS 2009), com o uso do equipamento de PCR em tempo real Rotor Gene Q, que utiliza discos giratórios e controle de temperatura da reação com ar, ao contrário das placas imóveis e metálicas, proporcionando mais rapidez e homogeneidade nos resultados. Já foram realizados experimentos com Southern blot com aproximadamente 500 amostras de indivíduos sadios. Pretende-se estabelecer a técnica e medição do comprimento telomérico por meio do PCR quantitativo nessas amostras e também em amostras de indivíduos portadores de anemia aplástica.