Estudo do papel fisiológico da proteína Nek7, no ciclo celular e na tumorigênese

• Processo: 12/22265-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Arina Marina Perez
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/08893-0 - Análise do envolvimento da proteína Nek7 nos mecanismos de resposta a danos no DNA através de estudos de proteômica e fosfoproteômica usando a técnica de SILAC, BE.EP.PD
• Assunto(s): Ciclo celular Centrossomos Transformação celular neoplásica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: centrossomo | ciclo celular | Nek7 | tumorigênise | Biologia molecular do Câncer

Resumo

As Neks são proteínas quinases similares a NIMA, proteína que é indispensável para que aconteça mitose em leveduras. Em mamíferos, existem 11 Neks e dessas apenas Nek2, Nek6, Nek7, e Nek9 tem sido diretamente implicada na regulação mitótica. Recentes estudos apóiam a idéia de que Nek6, Nek7, e Nek9 agem em conjunto numa mesma cascata de sinalização na mitose e de que Nek6 e Nek7 possuam um papel independente na formação do fuso mitótico e na citocinese. Entretanto, pouco se sabe acerca do mecanismo pelo qual Nek6, Nek7 e Nek9 podem contribuir para diferentes eventos na progressão mitótica bem como sobre as diferentes funções exercidas pelas Nek6 e Nek7 na célula. Além disso, os parceiros de interação com a Nek7 humana, seus substratos, e os diferentes processos celulares ao qual está envolvida, permanecem desconhecidos. Estudos recentes mostram o envolvimento da proteína Nek7 nos mecanismos de duplicação do centrossomo, além de que Nek7 encontra-se superexpressa em cânceres de mama, colo-retal, laringe, pulmão e linfoma não-Hodgkin . Desta forma, o emprego de estudos funcionais, celulares e fisiológicos visando dissecar o caminho de sinalização da Nek7 na regulação do centrossomo e do ciclo celular, são necessários para esclarecer a função de Nek7 na carcinogênese, uma vez que as alterações causadas por Nek7 nesses eventos, estão diretamente ligadas a tumorigênese. Para tal, neste trabalho, serão realizados estudos funcionais envolvendo silenciamento por RNA (iRNA) da expressão de Nek7 e sua superexpressão em células humanas bem como a identificação de proteínas que interagem com Nek7 através ensaios de pull down e imunoprecipitação, seguido de espectrometria de massa na tentativa de elucidar a cascata de sinalização a qual a Nek7 está envolvida. Estudos prévios em nosso laboratório demostraram uma possível interação entre as proteínas Nek7 e Mat1, através de ensaios de duplo hidrido, sendo assim serão realizados ensaios na tentativa de confirmar e desvendar possíveis função de Nek7 em relação a sua interação com Mat1, o qual faz parte de uma tríade regulatória juntamente com CDK7 e Ciclina H, onde juntas desempenham funções na regulação da transição no ciclo celular: iniciação da síntese do DNA na fase S e entrada em mitose bem como eventos relacionados a tumorigênese. Também serão realizados estudos fisiológicos e tumorigênicos, visando a análise da expressão e atividade de CAK (CDK7/Ciclina H/MAT1) em células MEFs (Mouse Embryonic Fibroblast) derivadas de embrião de camundongos Nek7-/-, análise do crescimento ou inibição de tumores em animais tratados com células siRNA, quinase dead e Nek7 fosfomiméticas bem como análise da expressão e atividade de CAK (CDK7/Ciclina H/MAT1) em células originadas de animais submetidos aos diferentes tratamentos. Para finalizar serão realizados bioensaios in vitro com o uso da plataforma HTS (High Throughput Screening) recentemente instalada no LNBio, para screening e caracterização de inibidores de Nek7 que possam ser utilizados para testes de inibição de crescimento de tumores. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

PEREZ, ARINA MARINA; AQUINO, BRUNO; VIVIANI, VADIM; KOBARG, JORG. Use of a special Brazilian red-light emitting railroad worm Luciferase in bioassays of NEK7 protein Kinase and Creatine Kinase. BMC BIOCHEMISTRY, v. 18, JUL 19 2017. (11/20086-1, 13/09594-0, 14/21700-3, 12/22265-3)