Interação de lectinas de Toxoplasma gondii com receptores do tipo Toll de células ...
Caracterização da interação de proteínas de micronema de Toxoplasma gondii com gli...
| Processo: | 14/13324-1 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Doutorado |
| Vigência (Início): | 01 de janeiro de 2015 |
| Vigência (Término): | 30 de setembro de 2018 |
| Área do conhecimento: | Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular |
| Acordo de Cooperação: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) |
| Pesquisador responsável: | Maria Cristina Roque Antunes Barreira |
| Beneficiário: | Flávia Costa Mendonça Natividade |
| Instituição Sede: | Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Toxoplasma gondii Imunidade inata Imunoquímica |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Glicobiologia | imunidade inata | proteínas de micronema | Receptores do tipo Toll | Toxoplasma gondii | Imunoquímica |
Resumo A toxoplasmose é causada pelo protozoário Toxoplasma gondii, parasito intracelular capaz de infectar qualquer célula nucleada de animais homeotermos. Na região apical desse parasito encontram-se várias organelas que liberam moléculas envolvidas no processo de adesão e invasão da célula hospedeira. Dentre esses produtos de secreção incluem-se os liberados por micronemas. Proteínas de micronemas associam-se entre si na superfície do taquizoíta e formam complexos, como TgMIC1/MIC4/MIC6. Os componentes TgMIC1 e TgMIC4 possuem domínios adesivos e são essenciais para a virulência do parasito. Em estudos anteriores, nosso grupo isolou o subcomplexo TgMIC1/MIC4, através de afinidade à lactose imobilizada, e demonstrou sua propriedade de estimular macrófagos murinos a secretar IL-12. A disponibilidade de formas recombinantes de TgMIC1 e TgMIC4 permitiu verificar que ambas as proteínas promovem a liberação de citocinas pró-inflamatórias, moduladoras da imunidade contra o parasito. Ademais, verificou-se que o efeito imunomodulador decorre da interação de TgMIC1 e TgMIC4, através de seus sítios lectínicos, com receptores do tipo Toll. Constatou-se ainda que macrófagos provenientes de camundongos TLR2-/- ou TLR4-/- produzem menores concentrações de TNF-±, IL-6 e IL-12p40 e IL-1² em resposta ao estímulo com rTgMIC1 e rTgMIC4. Finalmente, a utilização de mutantes para os sítios de glicosilação do receptor levou à demonstração de que rTgMIC1 e rTgMIC4 reconhecem N-glicanas de TLR2, com destaque para aquelas que ocupam a terceira e quarta posição no receptor. O objetivo deste projeto é estudar a interação de proteínas de micronemas com glicanas N-ligadas a TLR4. O estudo será iniciado com a geração de formas sistematicamente mutadas para os sítios de N-glicosilação de TLR4. Essas formas serão transfectadas em células HEK293T, visando identificar as glicanas de TLR4 implicadas na ativação desencadeada por TgMIC1 e/ou TgMIC4, ativação essa que se manifesta em células HEK293T através do aumento de produção de IL-8, detectada por ELISA. Os mutantes que proporcionarem resultados relevantes serão também transduzidos em macrófagos peritoneais de camundongos duplamente nocauteados para os genes que codificam TLR4 e TLR2; a ocorrência de resposta ao estímulo com TgMIC1 ou TgMIC4 será avaliada através da detecção de citocinas pró-inflamatórias no sobrenadante das culturas de macrófagos. A possível interação física direta estabelecida entre as proteínas de micronemas e as N-glicanas do receptor do tipo Toll, cuja ocorrência for sugerida pelos ensaios mencionados, será avaliada através de espectroscopia de impedância eletroquímica e os fatos estruturais responsáveis pela interação serão avaliados pela análise de cristais de complexos de proteínas de micronemas e TLR4 e modelagem molecular. (AU) | |
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