Proteinas de micronemas de t.gondii: novos papeis atribuiveis a sua interacao com receptores do tipo toll.

Resumo

Os mecanismos moleculares envolvidos no processo de adesão e invasão de T. gondii ainda são pouco compreendidos. Dentre as proteínas secretadas pelo parasita durante a invasão, as proteínas de micronemas (MICs) tem papel na adesão à célula hospedeira, como os complexos MIC1/MIC4/MIC6, ancorados na membrana do parasita. Sabe-se que com grande freqüência, os processos adesivos envolvem o reconhecimento de glicanas associadas a uma das partes ligantes. Estudos de nosso grupo demonstraram que o subcomplexo MIC1/MIC4 reconhece lactose; formas isoladas de rMIC1 e rMIC4 ligam-se, respectivamente, à fetuina e à asialo-fetuina. Por outro lado, Saouroset al, 2005 descrevem que MIC1 interage com a superfície da célula hospedeira através de ligação a ácido siálico. Essas observações anteriores motivam a proposta de investigar (1) a interação de rMIC1 e rMIC4 com uma ampla variedade de glicanas que contenham ß-galactose em posição terminal, sialiladas ou não sialiladas, pela abordagem de "glycoarray"; (2) a produção de citosinas induzida por rMIC1 e rMIC4 em células de camundongos deficientes da molécula adaptadora MyD88, TLR2 e TLR4, visando determinar a dependência da ativação desses receptores; (3) a ligação de rMIC1 e rMIC4 a glicanas associadas a TLR2 e TLR4, expressos por transfecção dos genes correspondentes em linhagem celulares que não expressam TLRs; a interação será manifesta pela ativação de produto do gene repórter de NFkB; ensaios de inibição da ligação por açúcares completarão essa abordagem; (4) a preservação ou inibição da ligação de rMIC1 e rMIC4 aos receptores Toll, quando estes correspondem a produtos de genes mutados em cada um dos 4 sítios de glicosilação do ectodomínio desses receptores; (5) os alvos de ligação no(s) TLR(s), ou seja, a(s) glicana(s) reconhecida(s) por rMIC1 e/ou rMIC4; (6) a interação de rMIC1 e rMIC4 com receptores de Toll expressos em células da imunidade inata e as respostas desencadeadas pela interação, enfatizando-se a resposta de produção de citosinas pró-inflamatórias. (AU)