Efeito do silenciamento gênico da ERK em cultura de células C2C12

• Processo: 16/13174-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2016
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2018
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Aline Regina Ruiz Lima
• Beneficiário: Luis Henrique Zucoloto
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FMB). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Assunto(s): Cardiologia Insuficiência cardíaca Sistema musculoesquelético Músculo esquelético Inativação gênica Expressão de proteínas Eletroforese Imunofluorescência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Erk | Insuficiência Cardíaca | Músculo esquelético | silenciamento genico | Cardiologia

Resumo

A insuficiência cardíaca crônica caracteriza-se por diminuição da capacidade para exercícios físicos devido à ocorrência precoce de fadiga e dispneia. Alterações de músculos esqueléticos podem contribuir para os sintomas. Uma alteração frequente é a modificação na composição das cadeias pesadas de miosina (MyHC), cujos mecanismos responsáveis não estão completamente esclarecidos. As proteínas quinases ativadas por mitógeno (MAPK), especialmente a ERK, modulam a expressão das MyHC. Entretanto, o papel da ERK nessa modulação ainda é controverso. Em estudo prévio, observamos que ocorre redução na expressão proteica de ERK 1/2 no diafragma de ratos com insuficiência cardíaca induzida por infarto do miocárdio, acompanhada de mudança das cadeias pesadas de miosina. Diante de informações conflitantes, o silenciamento da ERK em pesquisa com célula isolada pode trazer melhor compreensão sobre sua função no músculo esquelético. Portanto, a fim de identificar os efeitos específicos que a diminuição da proteína ERK, decorrente da insuficiência cardíaca, causa diretamente no músculo esquelético, será realizado o silenciamento gênico dessa proteína. Serão utilizadas células musculares C2C12 cultivadas em cultura. O silenciamento gênico será feito através de RNA de interferência específico para ERK. As isoformas das MyHC serão avaliadas por eletroforese e imunofluorescência. O trofismo muscular também será avaliado nas lâminas marcadas com imunofluorescência. Comparação entre os grupos será dada pelo Teste t de Student.