Via de sinalização Hippo, divisão assimétrica e tolerância a aneuploidia em células tumorais

• Processo: 16/24234-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2017
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2018
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Oswaldo Keith Okamoto
• Beneficiário: Beatriz de Araujo Cortez
• Supervisor: Neil Ganem
• Instituição Sede: Instituto de Biociências (IB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: Boston University (BU), Estados Unidos
• Vinculado à bolsa: 14/10519-6 - Via de sinalização hippo e divisão assimétrica de células-tronco tumorais derivadas de meduloblastoma humano, BP.PD
• Assunto(s): Células tumorais Aneuploidia Divisão celular Instabilidade cromossômica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: aneuploidy | asymmetric cell division | chromosomal instability | Hippo pathway | biologia de células tumorais

Resumo

A via de sinalização Hippo é uma cascata de fosforilações que culmina na inativação de YAP, inibindo sua atividade como fator de transcrição. Inicialmente esta via foi descrita por controlar a proliferação celular, crescimento dos órgãos e fenótipo de células-tronco, e posteriormente a inativação da via (ou atividade exacerbada de YAP) foram relacionados com diferentes tipos de câncer. Porém, os mecanismos pelos quais a via Hippo e a atividade de YAP favorecem o desenvolvimento tumoral ainda não foram totalmente elucidados. Dados recentes obtidos a partir de culturas de células normais mostram que a via Hippo é importante para a inibição da proliferação de células tetraploides. Esses dados, ainda não investigados em células tumorais, indicam que a via Hippo e YAP podem estar relacionados à instabilidade cromossômica e aneuploidia. Durante o desenvolvimento projeto de pós-doutorado que visa o estudo da regulação da divisão assimétrica pela via Hippo em células-tronco tumorais, foi observado um dado novo: células-filhas ainda durante as fases finais da mitose apresentaram conteúdo diferentes de YAP. O objetivo do presente projeto é elucidar os mecanismos moleculares que que controlam a assimetria de YAP durante a mitose, e como a atividade de YAP pode interferir na instabilidade cromossômica e heterogeneidade genética em culturas de células tumorais. Será avaliado por microscopia confocal de alta resolução se o padrão de segregação de moduladores da atividade de YAP (componentes da via Hippo e actina) se correlaciona com a segregação de YAP durante a mitose. Para mimetizar o comportamento de células-filhas com diferentes níveis de YAP, serão geradas linhagens celulares com superexpressão e knockout do gene. Com o uso dessas linhagens será possível relacionar a atividade de YAP com a indução de instabilidade cromossômica através da análise da segregação cromossômica, formação de micronúcleos e pontes cromossômicas por microscopia em tempo real. Para determinar se a atividade de YAP é importante para a tolerância a aneuploidia em células tumorais e se ela contribui para a heterogeneidade genética nestas células, os níveis de aneuploidia serão avaliados após a indução de erros de segregação cromossômica em células YAP+ e YAP-/-. (AU)