Análise da microheterogeneidade da N- e O-glicosilação de toxinas de serpentes do gênero Bothrops: identificação de glicopeptídeos intactos.

• Processo: 18/08794-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Exterior - Estágio de Pesquisa - Doutorado
• Data de Início da vigência: 06 de agosto de 2018
• Data de Término da vigência: 05 de fevereiro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Solange Maria de Toledo Serrano
• Beneficiário: Débora Andrade Silva
• Supervisor: Martin R. Larsen
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Instituição Anfitriã: University of Southern Denmark (SDU), Dinamarca
• Vinculado à bolsa: 16/16935-7 - Uma perspectiva sobre as modificações pós-traducionais em toxinas de venenos do gênero Bothrops: identificação proteômica de sítios específicos de N-glicanos e cisteínas., BP.DR
• Assunto(s): Bothrops Espectrometria de massas Venenos de serpentes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bothrops | intact glycopeptides | mass spectrometry | N-glycosylation | O-glycosylation | Snake venom | Glicoproteômica

Resumo

Venenos de serpentes são uma fonte rica em moléculas com atividade biológica, cuja maior parte são proteínas. A presença de modificações pós-traducionais (MPT) nestas proteínas, como a glicosilação, tem sido evidenciada em muitos estudos. Entretanto, a completa caracterização desta MPT ainda não foi alcançada, apesar de sua importância. A espectrometria de massas é uma técnica importante para a análise de glicosilação de proteínas e os recentes avanços nos novos equipamentos trouxeram mais possibilidades para o desafio da identificação dos sítios de glicosilação. Neste tipo de análise, é essencial sequenciar simultaneamente a cadeia polipeptídica e a cadeia de glicanos. Neste cenário, novas metodologias de fragmentação como Higher Energy Collisional Dissociation (HCD) e HCD-product Dependent Electron-Transfer Dissociation (HCDpdETD) surgiram como tecnologias promissoras. Desta forma, neste projeto, nós nos propomos a analisar os N-glicopeptídeos e O-glicopeptídeos intactos presentes nas glicoproteínas dos venenos de Bothrops jararaca, B. alcatraz, B. insularis, B. cotiara, B. jararacussu, B. moojeni, and B. fonsecai. Como metodologia de enriquecimento dos glicopeptídeos gerados pela tripsina, nos propomos a usar Hydrophilic Interaction Chromatography (HILIC) e dióxido de titânio em experimentos combinados e independentes. Estes dados irão possibilitar a compreensão da microheterogeneidade da glicosilação de toxinas, do padrão de glicosilação de cada classe de toxina e, se possível, avaliar as modificações das cadeias de glicanos, como a acetilação de unidades de ácido siálico. A O-glicosilação é uma característica especial que merece uma investigação mais apropriada, dado o fato de sua presença e importância em toxinas de venenos de serpentes ser completamente desconhecida.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

SILVA, DEBORA ANDRADE; ROSA-FERNANDES, LIVIA; PALMISANO, GIUSEPPE; TRAVAGLIA-CARDOSO, SILVIA R.; TOLEDO SERRANO, SOLANGE M.; LARSEN, MARTIN R.. Exploring the glycosylation levels of snake venom proteins by mass spectrometry: microheterogeneity determination of sweet spots in toxins of Bothrops snake genus. MOLECULAR & CELLULAR PROTEOMICS, v. 18, n. 8, p. 1-pg., 2019-08-13. (13/07467-1, 18/08794-0, 16/16935-7)