Relação da estrutura quaternária e atividade enzimática da beta-glicosidase de Spodoptera frugiperda (Sfbgly)

• Processo: 18/18537-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2018
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Enzimologia
• Pesquisador responsável: Sandro Roberto Marana
• Beneficiário: Felipe Akihiro Melo Otsuka
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 19/25955-0 - Reconstrução de sequências enzimáticas ancestrais para entender o câncer: Capacidade de evolução e resistência da tirosina quinase Abl1, BE.EP.DD
• Assunto(s): Celulase Elementos estruturais de proteínas Cinética enzimática Estrutura quaternária de proteína Spodoptera frugiperda
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Beta-glucosidases | Cinética Enzimática | estrutura de proteínas | estrutura quaternária | beta-glucosidases, estrutura de proteínas, cinética enzimática

Resumo

As beta-glicosidases GH1 possuem uma estrutura terciária característica, o (beta/alfa)8 barril, porém poucos estudos exploram detalhadamente a influência da sua estrutura quaternária sobre a sua atividade catalítica e função. Portanto, o objetivo deste projeto é caracterizar a estrutura quaternária da beta-glicosidase GH1 de Spodoptera frugiperda (Sfbgly; O61594; PDB 5CG0) com ênfase na sua interface dimérica correlacionando a formação destes oligômeros com efeitos sobre os parâmetros de cinética enzimática. Para tal serão construídos mutantes tendo como alvos os resíduos na interface do dímero de Sfbgly, visando inviabilizar a sua formação. De fato, analisando esta interface foram planejados dois mutantes pontuais (F155N e F155A) e um mutante sêxtuplo. Assim, é previsto que estas enzimas mutantes serão monoméricas e a enzima selvagem dimérica. As Sfbgly selvagem e mutantes serão produzidas como proteína recombinante em bactérias e em seguida serão realizados ensaios biofísicos (SEC-MALS, DLS e SAXS) para dissecar os estados oligoméricos destas proteínas. Adicionalmente, ensaios de cinética enzimática de estado estacionário serão realizados para avaliar a atividade da enzima selvagem e das mutantes. Em suma, estes dados permitirão pela primeira vez correlacionar detalhadamente atividade enzimática com a estrutura quaternária em uma beta-glicosidase GH1. (AU)

Publicações científicas

(As publicações científicas contidas nesta página são originárias da Web of Science ou da SciELO, cujos autores mencionaram números dos processos FAPESP concedidos a Pesquisadores Responsáveis e Beneficiários, sejam ou não autores das publicações. Sua coleta é automática e realizada diretamente naquelas bases bibliométricas)

OTSUKA, FELIPE A. M.; CHAGAS, RAFAEL S.; ALMEIDA, VITOR M.; MARANA, SANDRO R.. . Protein Science, v. 29, n. 9, JUL 2020. (18/18537-4, 18/25952-8, 16/22365-9)

OTSUKA, FELIPE A. M.; CHAGAS, RAFAEL S.; ALMEIDA, VITOR M.; MARANA, SANDRO R.. . Protein Science, v. 29, n. 9, p. 11-pg., 2020-07-13. (18/25952-8, 18/18537-4, 16/22365-9)

OTSUKA, FELIPE A. M.; BJELIC, SINISA. . Protein Science, v. 31, n. 7, p. 14-pg., 2022-07-01. (19/25955-0, 18/18537-4)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

OTSUKA, Felipe Akihiro Melo. Implicações de mutações e conformações na modulação de atividade enzimática em uma β-glicosídeo hidrolase e na tirosina quinase Abl1-KD. 2023. Tese de Doutorado - Universidade de São Paulo (USP). Conjunto das Químicas (IQ e FCF) (CQ/DBDCQ) São Paulo.