Relação da estrutura quaternária e atividade enzimática da beta-glicosidase de Spodoptera frugiperda (Sfbgly)

Resumo

As beta-glicosidases GH1 possuem uma estrutura terciária característica, o (beta/alfa)8 barril, porém poucos estudos exploram detalhadamente a influência da sua estrutura quaternária sobre a sua atividade catalítica e função. Portanto, o objetivo deste projeto é caracterizar a estrutura quaternária da beta-glicosidase GH1 de Spodoptera frugiperda (Sfbgly; O61594; PDB 5CG0) com ênfase na sua interface dimérica correlacionando a formação destes oligômeros com efeitos sobre os parâmetros de cinética enzimática. Para tal serão construídos mutantes tendo como alvos os resíduos na interface do dímero de Sfbgly, visando inviabilizar a sua formação. De fato, analisando esta interface foram planejados dois mutantes pontuais (F155N e F155A) e um mutante sêxtuplo. Assim, é previsto que estas enzimas mutantes serão monoméricas e a enzima selvagem dimérica. As Sfbgly selvagem e mutantes serão produzidas como proteína recombinante em bactérias e em seguida serão realizados ensaios biofísicos (SEC-MALS, DLS e SAXS) para dissecar os estados oligoméricos destas proteínas. Adicionalmente, ensaios de cinética enzimática de estado estacionário serão realizados para avaliar a atividade da enzima selvagem e das mutantes. Em suma, estes dados permitirão pela primeira vez correlacionar detalhadamente atividade enzimática com a estrutura quaternária em uma beta-glicosidase GH1. (AU)