Produção de marcadores de compartimentos intracelulares específicos para estudo do tráfego de GPCRs e proteínas g através da tecnologia BRET

• Processo: 19/00378-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2019
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Bioquímica e Molecular
• Pesquisador responsável: Lucas Tabajara Parreiras e Silva
• Beneficiário: Matheus Paulino Romano
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 16/24120-3 - Estudo dos papéis não-canônicos de proteínas G como novos mecanismos de sinalização celular com impacto na descoberta e desenvolvimento de fármacos, AP.JP
• Assunto(s): Biologia molecular Peptídeos e proteínas de sinalização intracelular Retículo endoplasmático Mitocôndrias Pesquisa bibliográfica Análise espaço-temporal Microscopia confocal Fluorescência
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: agonismo tendencioso | Sinalização de GPCRs | Sinalização não-canônica de proteínas G | tráfego intracelular | Sinalização de proteínas G

Resumo

Por meio de pesquisa bibliográfica, identificaremos proteínas residentes de diferentes compartimentos intracelulares, isto é, que sirvam como marcadores de compartimentos como Golgi, retículo endoplasmático, mitocôndrias e núcleo. Após seleção dos possíveis alvos, construiremos marcadores para diferentes compartimentos intracelulares através de metodologias de Biologia Molecular, fusionando-se tais proteínas, ou domínios de localização das proteínas, a diferentes isoformas de GFP ou RLucII. As construções serão analisadas transfectando células de mamíferos e avaliando-as por microscopia confocal de fluorescência para verificação e confirmação da correta localização. Finalmente, realizaremos experimentos de BRET entre as novas construções e GPCRs ou proteínas G de interesse, com o objetivo de um melhor entendimento da regulação espaço-temporal de tais moléculas.