Clonagem, expressão e purificação da enzima CRK3 de Leishmania mexicana (LmCRK3) e ciclina 6 de Leishmania major (LmCYC6)

• Processo: 19/01678-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2019
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2020
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Wagner Alves de Souza Júdice
• Beneficiário: Fábio da Silva Siqueira
• Instituição Sede: Pró-Reitoria Acadêmica. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Campus da Sede Mogi das Cruzes. Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Assunto(s): Leishmaniose Leishmania mexicana Clonagem Expressão de proteínas Purificação de proteínas Ciclinas Desenvolvimento de fármacos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: clonagem | Crk3 | doença negligenciada | expressão | Leishmania mexicana | Leishmaniose | Bioquímica de Microorganismos

Resumo

As leishmanioses são patologias consideradas negligenciadas pela Organização Mundial da Saúde, aproximadamente 70 países fazem parte da região endêmica da doença, mas vale ressaltar que os mais atingidos são os tropicais e subtropicais. Apesar de os países desenvolvidos relatarem casos, os subdesenvolvidos ou em desenvolvimento são os mais afetados devido à baixa condição sanitária, já que as fêmeas dos vetores utilizam de acúmulo de material orgânico e locais húmidos para a postura dos ovos. Atualmente aproximadamente 2 milhões de pessoas carregam o parasita, e são registrados em média 500 mil novos casos todos os anos. Os atuais tratamentos farmacológicos possuem alta toxicidade e podem levar mais de um semestre, então novos fármacos leishmanicidas estão em estudo. Sabe-se que a CRK3 é essencial para a progressão do ciclo celular do parasita, o que a tornou um grande alvo farmacológico. O presente projeto tem como objetivo a clonagem, expressão e purificação das enzimas LmCRK3, LdCRK3 e da ciclina LmjCYC6. A clonagem será realizada em cepa E. coli dH5± e expressão em cepa E. coli BL21 com indução por IPTG. A purificação será feita por cromatografia de afinidade em coluna de resina de níquel. A confirmação das proteínas alvo se dará por meio da técnica de Western blot. A obtenção dessas enzimas será importante para que em posteriores estudos seja possível a descoberta de novas moléculas inibidoras.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ROSA, LETICIA B.; GALUPPO, CAROLINA; LIMA, ROCHANNA L. A.; FONTES, JOSIELLE, V; SIQUEIRA, FABIO S.; JUDICE, WAGNER A. S.; ABBEHAUSEN, CAMILLA; MIGUEL, DANILO C.. Antileishmanial activity and insights into the mechanisms of action of symmetric Au(I) benzyl and aryl-N-heterocyclic carbenes. Journal of Inorganic Biochemistry, v. 229, p. 9-pg., 2022-04-01. (14/02205-1, 19/01678-7, 16/25112-4, 18/21120-8, 19/16904-2, 14/21129-4)