Estrutura da secretina do pilus tipo IV de Xanthomonas citri

• Processo: 18/21076-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2019
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Cristiane Rodrigues Guzzo Carvalho
• Beneficiário: Gabriel Guarany de Araujo
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/17303-7 - Estrutura e função de sistemas de secreção bacterianas, AP.TEM
• Bolsa(s) vinculada(s): 19/26988-9 - Estudo por criomicroscopia eletrônica da adsorção de um bacteriófago específico para pilus tipo IV ao seu receptor, BE.EP.DR
• Assunto(s): Biologia estrutural Secretina Xanthomonas citri Microscopia crioeletrônica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Crio-microscopia eletrônica | Pilus tipo IV | Secretina | Xanthomonas | Biologia estrutural

Resumo

Pili tipo IV (T4P) são filamentos extracelulares retráteis de bactérias que permitem sua motilidade e orientação sobre superfícies. Em espécies de Xanthomonas, um gênero notório por seus membros fitopatogênicos, T4P foi associado com processos de formação de biofilmes, adesão, e virulência. A maquinaria de secreção de T4P em Xanthomonas é um grande complexo de proteínas que atravessa as membranas da célula, por onde as subunidades do pilus são polimerizadas e translocadas ao meio extracelular. Este projeto de doutorado visa estudar o subcomplexo secretina que forma o canal na membrana externa por onde cruza o filamento. Para isto, será determinada sua estrutura tridimensional detalhada através da técnica de criomicroscopia eletrônica (cryo-EM). A secretina é constituída por PilQ, que se multimeriza para formar o canal. Esta proteína será clonada em vetores para adição de etiquetas de purificação e expressa, paralelamente, in vivo (em Xanthomonas citri pv. citri 306) e heterologamente em E. coli. Seu gene correspondente será deletado e complementado com os vetores, e será aferido se assim foram mantidas as propriedades fenotípicas in vivo da maquinaria de T4P editada. A secretina será purificada destas culturas e caracterizada por SEC-MALS e microscopia eletrônica de transmissão antes de ser levadas para cryo-EM para a determinação da sua estrutura. Por fim, se espera obter um modelo deste complexo essencial para T4P que direcionará futuros estudos em Xanthomonas. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

DANIELLE BASTOS ARAUJO; RAFAEL RAHAL GUARAGNA MACHADO; DEYVID EMANUEL AMGARTEN; FERNANDA DE MELLO MALTA; GABRIEL GUARANY DE ARAUJO; CAIRO OLIVEIRA MONTEIRO; ERIKA DONIZETTI CANDIDO; CAMILA PEREIRA SOARES; FERNANDO GATTI DE MENEZES; ANA CAROLINA CORNACHIONI PIRES; et al. SARS-CoV-2 isolation from the first reported patients in Brazil and establishment of a coordinated task network. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v. 115, 2020-10-23. (16/20045-7, 17/25123-9, 18/21076-9, 17/24769-2, 18/23680-0, 20/04680-0, 20/06409-1)

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