Clonagem dos transcritos alternativos B, D e I do gene supressor de tumor RECK em modelo de expressão em bactérias BL21 DE

• Processo: 09/54374-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2010
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Mari Cleide Sogayar
• Beneficiário: Heloisa Neumann Nogueira
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 01/10707-7 - Bases moleculares do controle da proliferação celular e origem de neoplasias na era de genômica e proteômica, AP.TEM
• Assunto(s): Genes supressores de tumor Processamento alternativo Glioma Escherichia coli
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: E.Coli | Isoformas | Reck | Splicing-Alternativo | Supressor-Dde-Tumor

Resumo

O gene RECK (REversion-inducing Cysteine-rich protein with Kazal motifs) foi isolado e caracterizado, inicialmente, como um gene supressor de tumor por causar a reversão fenotípica da linhagem DT, uma sub-linhagem de células NIH-3T3 transformada com v-K-ras. Splicing alternativos ou aberrantes de pré-mRNA podem ter papel importante em processos fisiológicos e no desenvolvimento de diversas patologias, incluindo o câncer. Três novas isoformas do gene supressor de tumor RECK, nominalmente RECK B (1.548b), RECK D (1-737b) e RECK I (1.101b), foram isoladas em nosso laboratório pela doutoranda Marina T. Lima (bolsista FAPESP No. 08/53971-5) e sua caracterização e investigação de seus perfis de expressão estão sendo perseguidas através de ensaios de RT-PCR em tempo real. Os resultados indicam que ao menos uma isoforma alternativa de RECK (RECK D), pode ter papel importante durante a progressão de gliomas para graus de maior malignidade. O advento das tecnologias de DNA recombinante revolucionou as estratégias para a produção de proteínas. Escherichia coli é ainda o sistema mais comumente utilizado para a produção de proteínas recombinantes, oferecendo como vantagens: baixo custo da fonte de carbono necessária para o crescimento, rápida acumulação de biomassa, receptividade para fermentação em alta densidade de células, e processo simples de ampliação (scaling-up). Assim, apesar das proteínas preditas para as isoformas de RECK apresentarem possibilidade de modificações pós-traducionais, tais como glicosilação, um sistema de expressão em BL21 DE oferece, como principal vantagem, a rapidez na obtenção dos produtos protéicos e a possibilidade futura de se gerar anticorpos específicos contra estes produtos. A rápida obtenção dos produtos protéicos a partir dos transcritos alternativos de RECK auxiliarão numa primeira abordagem de caracterização destas proteínas ainda inéditas, num campo de estudo cada dia mais competitivo relevante para a área de Câncer. (AU)