Expressao, purificacao e cristalizacao de fracao proteolitica da proteina ns3 do virus da febre amarela.

• Processo: 01/13446-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2002
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Biofísica Molecular
• Pesquisador responsável: Richard Charles Garratt
• Beneficiário: Ana Carolina de Sousa Silva
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas Febre Vírus Cristalografia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Amarela | Cristalografia | Febre | Proteina | Recombinante | Virus

Resumo

Neste trabalho visamos a obtenção de cristais do domínio proteolítico da proteína não estrutural NS3 do vírus da febre amarela. Primeiramente, será necessário obter uma grande quantidade da proteína de interesse com alto grau de pureza, depois cristais da mesma, num estado relacionado à sua atividade biológica. A NS3p será expressa em Escherichia coli, e purificada utilizando como método de purificação, uma coluna de afinidade para histidinas, NTA- níquel (Qiagen), uma vez que a proteína recombinante possui em seu N- terminal 6 resíduos de histidina. Para cristalização é usada a difusão de vapor (equilíbrio entre duas soluções através de uma fase de vapor), com os métodos "hanging-drop" (gota pendurada) e, "sitting-drop" (gota sentada). Uma vez obtidos os cristais, os mesmos serão analisados por difração de raios-X, afim de determinar a estrutura tridimensional da proteína que não faz parte do presente projeto. O conhecimento desta estrutura auxiliaria nos estudos terapêuticos contra os outros flavivírus, tais como os responsáveis pela dengue e encefalites. (AU)