Identificação de genes diferencialmente metilados em linhagens tumorais de mama através de tratamento com agente desmetilante e construção de bibliotecas subtrativas de cDNA

• Processo: 04/09574-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de outubro de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Anamaria Aranha Camargo
• Beneficiário: Murilo Vieira Geraldo
• Instituição Sede: Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer (ILPC). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biomarcadores tumorais Neoplasias mamárias Metilação de DNA Biblioteca gênica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biblioteca Subtrativa | Cancer De Mama | Marcadores Tumorais | Metilacao | Rash

Resumo

Entre os diversos tipos de câncer, o câncer de mama tem grande incidência no Brasil, sendo a principal causa de mortes entre as mulheres. O diagnóstico da doença, quando rápido e preciso, pode fornecer até 95% de chance de cura. No entanto, devido ao elevado custo dos exames para o diagnóstico da doença, a grande maioria dos casos são diagnosticados tardiamente no nosso país. Alterações epigenéticas têm sido associadas com a tumorigênese, sendo a metilação um dos mecanismos mais estudados. Alterações no padrão de metilação têm sido utilizadas na caracterização de genes relacionados ao câncer, podendo também ser utilizadas como marcador tumoral para o diagnóstico e prognóstico da doença. Este projeto tem como objetivo a identificação de genes silenciados por metilação em linhagens tumorais de mama, a fim de ampliar o leque de marcadores moleculares tumorais disponíveis. Para tanto, linhagens tumorais de mama serão tratadas com o agente desmetilante 5-aza-2'-deoxícitidina, o qual é capaz de reativar a expressão de genes silenciados por metilação. Para a identificação e caracterização dos genes reativados pelo tratamento, serão construídas bibliotecas subtrativas de cDNA através da técnica de RaSH. A comparação das seqüências oriundas dessas bibliotecas com seqüências depositadas em bancos de dados públicos permitirá a identificação dos genes re-ativados pelo tratamento e possivelmente regulados por metilação. Tais genes serão então validados experimentalmente por RT-PCR utilizando, para tanto, cDNA das linhagens preparado antes e após o tratamento. (AU)