Efeitos dos miRNAs humanos miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p na expressão gênica e migração em célula imortalizada de nasofaringe

Autor(es)

Bárbara Grasiele Müller Coan

• Tipo de documento: Tese de Doutorado
• Imprenta: Botucatu. 2022-03-23.
• Instituição: Universidade Estadual Paulista (Unesp). Faculdade de Medicina. Botucatu
• Data de defesa: 2022-02-21
• Orientador: Deilson Elgui de Oliveira; Danillo Pinhal

Resumo

Os cânceres são doenças neoplásicas malignas com etiopatogenia complexa. As células transformadas adquirem diversas propriedades que propiciam alterações em taxas de migração, invasão e sobrevivência celular, facilitando a formação de metástases. Esse processo sofre a influência de diversos fatores, inclusive de pequenos RNAs não codificantes, como os miRNAs. Os miRNAs são moléculas que canonicamente impedem a tradução de um mRNA, podendo agir em diversos processos celulares, incluindo na carcinogênese e progressão do câncer, como o carcinoma de nasofaringe (NPC). O NPC é um câncer agressivo com alta taxa de invasão em tecidos adjacentes, como base do crânio, seios nasais e órbitas, além de alta taxa de metástase para linfonodos regionais. Sua forma não queratinizante compreende mais de 95% dos casos e quando indiferenciado, é fortemente associado ao vírus de Epstein-Barr (EBV). Em um estudo recente de nosso grupo de pesquisa, observamos que células imortalizadas de nasofaringe (NP69) apresentavam um aumento na expressão do miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p quando transfectadas com a proteína latente de membrana 1 (Latent Membrane Protein 1 – LMP1) do EBV proveniente da variante viral M81, em comparação com a LMP1 proveniente da variante viral B95-8A. Portanto, este estudo visa elucidar os efeitos do miR-100-5p, miR-192-5p e miR-574-3p na viabilidade, proliferação e migração de células imortalizadas de nasofaringe (NP69) cultivadas in vitro. Para tanto, foi realizada a predição dos alvos dos respectivos miRNAs e o enriquecimento de vias para inferir quais vias de sinalização intracelular poderiam ser moduladas por cada miRNA, seguida pela análise dos transcritos dos genes alvos selecionados. Adicionalmente, células NP69 foram transfectadas com os miméticos do miR-100-5p, miR-192-5p ou miR-574-3p para a análise de comportamento celular. Quando essas foram transfectadas com o mimético do miR-192-5p, foi observada a redução de 40% no transcrito do gene RAB2A e redução de 43% na sua migração celular. No enriquecimento de vias, o miR-192-5p teve sua ação predita em vias como MAPK, GPCRs, TKR e TGF-β. Células NP69 transfectadas com os miméticos do miR-100-5p e miR-574-3p reduziram significativamente os transcritos dos genes FZD8 e STC1, respectivamente. Entretanto, nos ensaios funcionais realizados, não foram observadas alterações significativas no comportamento celular. Com esses resultados pode-se observar que o miR-192-5p possui uma função de supressor tumoral, elucidando parte de sua função em células de nasofaringe. Portanto, isso demonstra sua importância no contexto do NPC e a necessidade de seu estudo adicional. (AU)

• Processo FAPESP: 17/22312-5 - Efeitos de microRNAs endógenos humanos no repertório de células-tronco cancerígenas e progressão de Cânceres in vivo empregando modelo Zebrafish
• Beneficiário: Barbara Grasiele Muller Coan
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado