Um modelo para a geracao das camaras atriais.

Resumo

Este projeto destina-se a avaliar um modelo para a geração das câmaras atriais do coração construído com base em resultados obtidos pelo laboratório e outros grupos ao longo dos últimos 3 anos. Segundo este modelo, o compartimento atrial é definido pela expressão seletiva da enzima sintetizadora de ácido retinóico (AR) em precursores cardíacos posteriores, enquanto o compartimento ventricular (anterior) é definido na ausência de AR. O modelo prevê duas fases dependentes de AR: as fases de especificação e de determinação. Para estabelecer o substrato morfológico destas duas fases, utilizaremos técnicas de imunohistoquímica e/ou hibridação "in situ" a fim de evidenciar a sobreposição putativa entre as células precursoras cardíacas posteriores e as zonas do embrião que expressam a RALDH2, enzima chave da sinalização pelo AR. Como marcadores do fenótipo cardíaco geral, serão utilizadas sondas antisense contra os genes Nkx2.5 e GATA4, enquanto que os marcadores específicos dos fenótipos atrial e ventricular serão sondas antisense para os genes Hey-1 e AMHC1, Hey-2 e Irx4, respectivamente. Para a marcação da sinalização pelo AR, utilizaremos uma sonda antisense contra o gene da RALDH2 ou anticorpos anti-RALDH2. O projeto envolve técnicas clássicas em embriologia como cultura de embriões de aves e mamíferos e estudos de "fate mapping", com o objetivo de caracterizar minuciosamente a inter-relação entre a sinalização pelo AR e o desenvolvimento das câmaras cardíacas. (AU)