Expressão de pró-colágeno do tipo I, MIP-1alfa e SDF-1alfa por fibroblastos de gengiva e polpa dental humanas estimulados por ácido lipoteicóico de Enterococcus faecalis e lipopolissacarídeo de Escherichia coli e Porphyromonas gingivalis

Resumo

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo, sendo constituída por diversas células, dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório e com a produção de componentes da matriz extracelular fundamentais para o reparo, como por exemplo, o colágeno. Assim sendo, este projeto tem como objetivos: 1. Avaliar a expressão de pró-colágeno tipo I; 2. Avaliar a expressão de quimiocinas tais como MIP-1alfa e SDF-1alfa por fibroblastos de gengiva e polpa dental humanas estimulados por ácido lipoteicóico (LTA) de E. faecalis e lipopolissacarídeo (LPS) de E. coli e P. gingivalis; 3. Comparar a liberação destas quimiocinas e do pró-colágeno pelos fibroblastos quando estimulados por LTA ou por LPS e 4. Comparar o comportamento das células provenientes de gengiva e polpa de um mesmo paciente frente aos mesmos estímulos. Serão coletadas polpas de terceiros molares não irrompidos e biópsias de gengiva saudável de um mesmo indivíduo (5 pacientes). Serão picotadas e armazenadas em meio para a cultura de fibroblastos, os quais serão utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0,8 - 80 ug/mL de LTA de E. faecalis e 1 - 100 ug/mL de LPS de E. coli ou P. gingivalis será adicionado às placas e depois de 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante e as células serão coletados para algumas análises. Para o estudo da expressão de mRNA de pró-colágeno tipo I, MIP-1alfa e SDF-1alfa, será feito PCR em tempo real a partir de RNA total extraído das células em cultura. Para o estudo da expressão protéica de pró-colágeno tipo I, será feito Western blot e para MIP-1alfa e SDF-1alfa, ELISA. A análise estatística será realizada por meio do programa GraphPad Prism 3.0, aplicando-se o teste ANOVA seguido do teste de correção de Bonferroni. Será adotado nível de significância de 5% para que as diferenças sejam consideradas estatisticamente significativas. (AU)