Expressão de pró-colágeno tipo 1, MIP-1± alfa e SDF-1 alfa por fibroblastos da polpa humana estimulados por ácido lipoteicóico de Streptococcus mutans

Resumo

A polpa dental é formada de tecido conjuntivo frouxo, sendo constituída por diversas células dentre as quais os fibroblastos são as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressões diversas, estas células respondem com a liberação de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatório e com a produção de componentes da matriz extracelular, por exemplo o colágeno, fundamentais para o reparo. Assim sendo, este projeto tem como objetivo: 1. avaliar a expressão de pró-colágeno tipo 1 e 2. avaliar a expressão de quimiocinas tais como MIP-1α e SDF-1α por fibroblastos da polpa humana estimulados por ácido lipoteicóico (LTA) de S. mutans. Serão coletadas polpas de terceiros molares não irrompidos, picotadas e armazenadas em meio para a cultura dos fibroblastos, os quais serão utilizados a partir da quarta passagem. Após adesão das células a placas de 24 poços, o meio de cultura contendo 0-80 mg/mL de LTA de S. mutans será adicionado às placas e depois de 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante será coletado para algumas análises. Para o estudo da expressão de mRNA de pró-colágeno tipo I, MIP-1α e SDF-1α, será feito RT-PCR a partir de RNA total extraído das células em cultura. Para o estudo da expressão do pró-colágeno tipo I, será feito Western blot e para MIP-1α e SDF-1α, ELISA. A análise estatística será realizada por meio do programa GraphPad Prism 10, aplicando-se o teste ANOVA seguido do teste de correção de Bonferroni. Será adotado nível de significância de 5% para que as diferenças sejam consideradas estatisticamente significativas. (AU)