Papel da sinalização pelo receptor purinérgico P2X7 e das deacetilases de histona na resposta imune inata de fibroblastos humanos periodontais: Implicações na patogênese da periodontite

Resumo

Os fibroblastos são atualmente considerados como componentes ativos da resposta imune, uma vez que essas células expressam receptores Toll-like (TLR), reconhecem padrões moleculares associados a patógenos, e são capazes de mediar a produção de citocinas e quimiocinas durante a inflamação. Os mecanismos moleculares que contribuem para a resposta inflamatória mediada pelas células fibroblásticas, de maneira diferencial, dependendo da sua origem, permanecem pouco claros, uma vez que a maquinaria regulatória da inflamação é incrivelmente complexa. Sabe-se que P. gingivalis induz a secreção da citocina IL-1² por meio de mecanismos ainda pouco elucidados envolvendo ATP extracelular e o receptor purinérgico P2X7. Dados preliminares do nosso grupo mostram que a expressão do RNAm para o receptor P2X7 está diferentemente modulada em fibroblastos humanos gengivais quando comparados aos fibroblastos de ligamento periodontal do mesmo doador. Evidências preliminares mostram ainda o aumento da expressão de P2X7 em modelo experimental animal de indução da doença periodontal, demonstrando o envolvimento desse receptor na patogênese da periodontite. A literatura reporta também que a regulação da produção de citocinas pró-inflamatórias pode ser influenciada por vários mecanismos, dentre os quais a regulação da acetilação de histonas por enzimas deacetilases de histonas (HDACs). Diante disso, o presente trabalho tem como objetivo investigar o envolvimento da sinalização purinérgica no desenvolvimento da periodontite e como essa sinalização pode ser regulada por mecanismos epigenéticos, como a modulação da expressão de mediadores inflamatórios pela regulação da expressão e atividade de HDACs, no contexto da patogênese da periodontite. Para isso, fibroblastos humanos primários derivados de gengiva e ligamento periodontal de doadores saudáveis e com periodontite crônica serão avaliados quanto à expressão gênica e proteica de P2X7 e HDACs, bem como a influência dos mesmos na modulação da expressão de citocinas e quimiocinas quando estimulados por LPS de P. gingivalis. A expressão do RNAm para P2X7, HDACs e citocinas/quimiocinas será avaliada por RT-qPCR e das proteínas por ELISA ou Western blotting. Imunofluorescência também será utilizada para confirmação dos achados de expressão proteica e para eventuais demonstrações de diferenças encontradas entre os grupos experimentais. A atividade das enzimas HDACs nas amostras será detectada por ensaio colorimétrico.