Cryptococcus neoformans: estudos da via de transdução de sinal que controla o crescimento a 37 graus empregando ferramentas de biologia molecular, e caracterização epidemiológica molecular e enzimática

Resumo

O fungo dimórfico Cryptococcus neoformans é um patógeno oportunista de pacientes imunocomprometidos pela Aids, transplantes e sob o tratamento contra o câncer. Dentro da espécie C. neoformans, existem três variedades: neoformans, grubii e gattii. E cinco sorotipos: A (var. grubii), D e AD para C. neoformans, e B e C para C. neoformans var. gattii. A distribuição de Cryptococcus neoformans vars. neoformans e grubii é mundial, enquanto C. neoformans var. gattii é encontrada em regiões tropicais e subtropicais. O sorotipo A é prevalente tanto em isolados clínicos como ambientais. C. neoformans é um fungo heterotálico possuindo dois mating-types: Mat e Mata. As células do mating-type Mat são mais virulentas em modelo animal e, também, são prevalentes tanto no ambiente como em isolados clínicos. O fato de C. neoformans causar doenças em pacientes imunocomprometidos leva à necessidade de tratamento para o resto da vida do paciente com antifúngicos do tipo azoles. Entretanto, linhagens do fungo, as quais adquiriram resistência contra o tratamento, são isoladas em pacientes. Assim, torna-se essencial pesquisar alternativas de tratamentos. Para tal, é indispensável que se conheça a biologia do fungo para que novos alvos para a ação de drogas sejam identificados. A biologia de C. neoformans tem sido estudada extensivamente e vários fenótipos que se relacionam com virulência foram identificados. Dentre eles, destaca-se a caracterização de uma via de transdução de sinal que permite que este fungo cresça à temperatura fisiológica de mamíferos (37° C), a qual é controlada pela proteína ras1. Poucos elementos que compõem esta via de transdução de sinal foram identificados. Nesse sentido, um projeto de supressão por múltipla cópia empregando uma biblioteca genômica feita em um plasmídio telomérico levou ao isolamento do gene que codifica a proteína rac1. Superexpressão dessa proteína resgata a capacidade do mutante ras1 de C. neoformans de crescer a 37°C. A técnica de supressão por múltipla cópia usando este banco apresenta algumas desvantagens. Portanto, a proposta de trabalho, apresentada aqui, visa utilizar a técnica de mutação por inativação insercional para descobrir genes envolvidos no crescimento a alta temperatura em C. neoformans que possam ser empregados com alvo de drogas em novas terapias contra esse fungo. Outro aspecto importante a ser considerado relacionado à criptococcose é a sua epidemiologia. A epidemiologia de isolados clínicos e ambientais no Brasil é alvo de estudos de caracterização molecular, mas dedica- se apenas a estabelecer a relação entre esses isolados. Portanto, um detalhamento epidemiológico associando marcadores moleculares (por exemplo, PCR-RFLP, RFLP e RAPD), marcadores enzimáticos (por exemplo, produção de fosfolipase B) e estudos da severidade da doença (criptococcose) que esses isolados causam em pacientes ainda não foi realizado. Outra proposta de trabalho é desenvolver ferramentas que permitam não só caracterizar os isolados, mas também agrupá-los em famílias geográficas que causam doenças com severidades distintas em pacientes submetidos a transplante renal na Unidade de Transplante de Rins da Unifesp. (AU)