Caracterizacao global do perfil de expressao genica dos estagios inicial e avancado do melanoma e analise funcional de candidatos a supressor de tumor ou oncogene:consolidando ferramentas e dados...

Resumo

Dados prévios, resultantes da utilização de microarranjos contendo cDNA ORESTES cujas seqüências mapeiam em regiões cromossômicas associadas ao desenvolvimento do melanoma, revelaram 4 novos genes com potencial envolvimento na progressão tumoral. Além disso, foram geradas duas bibliotecas subtrativas, cuja análise inicial (20% dos clones) indicou representarem duas coleções de genes com marcante expressão diferencial entre os estágios de crescimento radial e metastático do melanoma. Assim, pretendemos definir e caracterizar o papel desempenhado pelos genes identificados no desenvolvimento do melanoma e ampliar as análises de expressão gênica diferencial. Para isso propomos: 1. seqüenciar completamente as bibliotecas subtrativas; 2. realizar análises in silico das seqüências para melhor definição de candidatos a marcadores diagnóstico/prognóstico ou terapia direcionada; 3. confirmar por Northern blotting e Real-Time RT-PCR, o perfil de expressão diferencial dos genes candidatos selecionados em linhagens celulares e amostras tumorais; 4. causar interferência funcional, através da técnica de RNAi, sobre os genes selecionados. (AU)