Analise estrutural e bioquimica da septina 7 humana.

Resumo

As septinas estão presentes em fungos e animais e pertencem a uma família de proteínas cujo domínio de ligação à GTP é conservado. Formam complexos homo e heterooligoméricos que podem unir-se em filamentos. Em mamíferos, septinas têm sido associadas a uma variedade de funções celulares tais como citocinese e exocitose e, também, no desenvolvimento de algumas doenças neurodegenerativas e câncer. Estudos filogenéticos moleculares em humanos têm identificado treze septinas que são divididas em quatro subfamílias (grupos I, II, 111 e IV). Este trabalho tem como objetivo clonar, expressar em Escherichia coli em forma solúvel e obter informações estruturais e bioquímicas da proteína humana septina 7 e de seu domínio GTPase. Estudos estruturais serão feitos utilizando técnicas espectroscópicas como dicroísmo circular, fluorescência e saxs. O gene da septina 7 será amplificado a partir de uma biblioteca cDNA de cérebro fetal bovino utilizando oligonucleotídeos sintetizados. Os fragmentos amplificados serão clonados no vetor pGEM-T e sub-clonados nos vetores de expressão pET-TV. Dados anteriores obtidos por nós mostram que a proteína septina 7 GTPase foi expressa em E. coli e purificada em coluna de afinidade e de gel filtração de forma solúvel. Os espectros da septina 7 GTPase obtidos são característicos de moléculas formadas principalmente por estruturas irregulares hélices e uma pequena fração de folhas. Os resultados deste trabalho acrescentarão informações fundamentais para o conhecimento estrutural e bioquímico das septinas humanas. (AU)