Estudos bioquímicos de um inibidor de serinoproteases do tipo kakal presente em glândulas salivares do mosquito Aedes aegypti

Resumo

O mosquito Ae. aegypti é o vetor clássico da febre amarela e do dengue. Em dípteras hematófagas, a digestão do sangue é realizada por enzimas proteolíticas, que também podem estar envolvidas na relação parasita-vetor. Inibidores de proteases previnem a ativação descontrolada e prematura das enzimas e estão envolvidos no controle de diversos processos fisiológicos. Com a finalidade de conhecer melhor sobre a biologia do vetor do dengue, o objetivo deste trabalho será a expressão e a caracterização de um inibidor de serinoproteases do tipo Kazal presente em glândulas salivares do mosquito Ae. aegypti. Para isso, serão construídos oligonucleotídeos baseados na seqüência de nucleotídeos depositada no banco de dados sob o número de acesso DQ 440176, o fragmento de DNA amplificado por PCR será clonado em vetor de expressão pPIC9 e a proteína recombinante será expressa em levedura Picha pastoris. A proteína recombinante será posteriormente purificada e caracterizada cineticamente sobre diferentes serinoproteases. Paralelamente, avaliaremos o provável papel desta proteína no controle da coagulação sangüínea, visto a sua expressão em glândulas salivares do mosquito. Assim como, avaliaremos o perfil de transcrição desde gene em diferentes tecidos de fêmeas em diferentes tempos após a alimentação com sangue, e análise da presença da proteína nativa em diferentes tecidos utilizando anticorpos policlonais, que serão produzidos neste trabalho, por western blotting. (AU)