Avaliacao de genes envolvidos na via de sinalizacao induzida pela proteina dermicidina no cancer de mama.

Resumo

Em um estudo recente, a expressão e função de DCD foram investigadas usando o método de RNA de interferência (RNAi) em três clones de células de carcinoma de mama MDA-361 RNAi-DCD denominados IBC-I, II, III e clone MDA-361 pKLO (controle). Ensaios in vitro e in vivo mostraram que o silenciamento do gene DCD diminui a resistência celular aos efeitos citotóxicos dos agentes H202, estaurosporina e combinação e TNF e cicloheximida, como também o crescimento dos tumores após a inoculação das células em camundongos NUDE. Em seguida, através da técnica de DNA microarray (Affymetrix gene chip) foi revelado. que apenas 12 genes tiveram suas expressões aumentadas, enquanto aproximadamente 132 genes tiveram suas expressões reduzidas após silenciamento mediado por RNAi. Desta lista, tornaram-se de grande interesse e relevância para os estudos futuros os genes ERBB2 (co-receptor de EGF), TXHF (thioredoxin interacting protein), calcineurina (protein phosphatase 3, calcineurin A), calmodulina (calcium/calmodulin-dependent protein kinase), calreticulin, GDF15 (growth differentiation factor 15), vascular endothelial growtb factor (FGD1) e amphiregulin, ente outros. Em seguida, em análise comparativa dos genes identificados por DNA microarray através da metodologia GEST foi predito que via PIK3/AKT/mTOR pode ser a via preferencial de sinalização da proteína DCD na atividade de proliferação e sobrevivência celular. Também foram feitos estudos que mostraram uma atividade serino-protease da proteína DCD recombinante em ensaios de proteólise do peptídeo Phe-Arg-AMC. Estes dados sugerem que a proteína DCD pode exercer suas funções via interação e clivagem limitada de proteínas ou receptores associados com a proliferação e sobrevivência celular. No presente projeto pretende-se 1) validar os genes regulados pela proteína DCD no câncer de mama por ensaios de PCR quantitativo e western blott, 2) identificar a possível participação da via PIK3/AKT/mTOR na sinalização intracelular induzida pela DCD e 3) identificar substratos naturais e inibidores peptídicos e orgânicos da protease DCD. (AU)