Análise da expressão de genes regulados pela proteína dermicidina nas células do melanoma maligno g-361 pelo método de dna-microarray

Resumo

A proteína dermicidina (DCD) é codificada por um gene localizado na porção 12q13.1 do cromossomo 12, presente apenas em primatas e humanos. A proteína é secretada por células de glândulas exócrinas da pele, melanócitos, neurônios e células epiteliais da mama normal. Alguns estudos mostraram a importância da proteína DCD em processos oncogênicos nos carcinomas de mama, próstata e melanoma, revelados por seu papel como um fator de crescimento e sobrevivência celular. Nos estudos realizados no nosso laboratório mostramos que a DCD é expressa em células normais da pele, placenta, cérebro e em vários tumores, incluindo os carcinomas de mama e melanoma maligno. Ensaios biológicos e bioquímicos mostraram que o "knockdown" na expressão de DCD no melanoma maligno G-361 via RNA de interferência (RNAi) diminuiu significativamente o crescimento in vitro em cultura celular e a formação de tumores em camundongos Nude. Resultados similares foram obtidos quando camundongos Nude transplantados com células de melanoma G-361 foram tratados com anticorpos policlonais de coelhos contra a proteína DCD, administrados uma vez por semana por 5 semanas. No presente projeto pretende-se identificar os genes diferencialmente expressos em células do melanoma maligno G-361 controle e células expressando RNAi para a DCD analisando a expressão gênica global pela tecnologia de microarranjo de DNA (GeneChip Human 1.0 ST array). Os genes diferencialmente expressos (> 3-vezes) entre os grupos controle e expressando RNAi serão validados por ensaios de expressão por PCR em tempo real, imuno-histoquímica, Western-blot e imunofluorescência indireta. Pretende-se também fazer avaliações funcionais de vias de sinalização intracelular de proliferação e resistência à morte celular. Espera-se mostrar com estes estudos que a proteína DCD atua como um oncogene promovendo a transcrição de genes envolvidos na transformação e progressão dos melanócitos normais a melanócitos malignos.