Papel do sistema cinina na lesão por isquemia e reperfusão de fígados de ratos

Resumo

As ações biológicas e os efeitos farmacológicos da bradicinina (BK) são mediados por dois receptores, um constitutivo (B2R) e outro induzido (B1R). No fígado, BK tem papel no controle da microcirculação hepática, já que induz resposta hipertensiva portal (RHP), a qual nós verificamos que é mediada por B2R, mas não por B1R, tanto em ratos normais quanto naqueles submetidos a diferentes agentes de agressão hepática (de inflamação a cirrose). Nesta última situação, verificamos que há aumento da expressão de B1R com a progressão para a cirrose (Nagaoka e cols., 2006).Transplante hepático é terapia bem aceita para hepatopatias em estágio avançado, como a cirrose. A incidência de disfunção primária e de mau funcionamento inicial do enxerto é dependente do tempo de preservação a frio e está relacionada com lesão associada com a colheita do órgão, preservação e reperfusão, isto é, lesão por isquemia-reperfusão (IRI). O mecanismo básico da IRI é ainda pouco entendido. Verificamos que a IRI em fígados de rato é caracterizada por dois processos de morte celular, sendo um evento inicial de necrose das células endoteliais sinusoidais seguida de uma fase tardia com apoptose dos hepatócitos (Huet e cols., 2004). Durante isquemia, há perda do equilíbrio entre mediadores vasoativos causando forte alteração na microcirculação hepática. Na reperfusão, há ativação das células de Kupffer e subseqüente síntese de citocinas inflamatórias, que agrava ainda mais as alterações na microcirculação. O papel do sistema cinina neste processo ainda não foi estudado e o objetivo deste projeto é estudar a resposta hipertensiva portal a BK neste modelo, bem como caracterizar a expressão ou não de B1R. Para tanto utilizaremos o sistema de perfusão de fígado isolado e para avaliar a IRI, utilizaremos marcadores bioquímicos, como liberação de enzimas (LDH, AST, ALT), depuração do BSP e produção de glicose pelos fígados preservados e reperfundidos. A expressão do B1R será avaliada por Western Blotting. A morte celular será avaliada por análise histológica (tripan blue), fragmentação do DNA (laddering), ELISA, dosagem enzimática da caspase-3 e TUNEL. Espera-se com este projeto entender melhor o processo de IRI e com isso melhorar a qualidade do fígado a ser transplantado e conseqüente sobrevida do receptor.