O receptor do PAF na polarização de macrófagos para fenótipo M1 e M2: localização, interações e vias de sinalização

Resumo

O fator ativador de plaquetas (PAF) é gerado a partir de fosfolipídeos da membrana celular por ativação de fosfolipases. O receptor para o PAF (PAF-R) é acoplado à proteína G e está localizado na membrana celular e nuclear de leucócitos e de vários outros tipos celulares. Existem evidências de que a ativação do PAF-R possa modular os macrófagos de modo a expressarem um fenótipo ativador (M1) ou supressor (M2). Em infecções, o tratamento com antagonistas do PAF-R aumenta a infecção por diminuir a capacidade microbicida dos macrófagos. Já em tumores, os antagonistas do PAF-R inibem o seu crescimento, aparentemente por impedir o estabelecimento de um estado supressor em macrófagos em função da sua interação com células tumorais. A fagocitose de partículas opsonizadas induz um estado ativador em macrófagos, enquanto que a fagocitose de células apoptóticas induz um fenótipo supressor, e trabalhos do nosso laboratório indicam que este último efeito é dependente do PAF-R. Estes dados indicam que a ativação do PAF-R possa polarizar os macrófagos tanto para um fenótipo M1 como M2. O presente projeto tem por objetivo estudar os mecanismos moleculares que determinam esta polarização. Para tanto, compararemos macrófagos polarizados por métodos já descritos (IFN-gamma + LPS para M1 e IL-4 para M2) com macrófagos fagocitando partículas opsonizadas com IgG, supostamente polarizados para M1, ou fagocitando células apoptóticas, portanto polarizados para M2. Para isto, serão analisados marcadores já descritos para o fenótipo M1 (TNF-alpha, MCP-1 e IL-6, IL-12, CD64) e para o fenótipo M2 (TGF-beta, IL-10, CD36 e CD206). Vamos também avaliar outros possíveis marcadores como LTB4, PGE2 e NO. O efeito do PAF-R na polarização de macrófagos será investigado utilizando-se antagonistas do mesmo ou macrófagos de animais deficientes geneticamente do PAF-R. Em outra etapa, analisaremos as vias de sinalização acionadas pelos estímulos polarizantes e a possível interferência do PAF-R nestas vias. Será também determinada a quantidade e localização dos PAF-R (membrana plasmática e nuclear) em macrófagos submetidos aos diferentes estímulos.