Análise do Papel da Arginase II (ARG2) na Patogênese dos Tumores da Tiróide

Resumo

Utilizando a técnica de SAGE com posterior validação por PCR em tempo real e imunohistoquímica, verificamos que o gene ARG2 (Arginase II) é um dos marcadores cuja expressão está aumentada em carcinoma folicular da tiróide (FTC), mas não se encontra expresso em tiróide normal e adenoma folicular da tiróide (FTA). Posteriormente, demonstramos que a ARG2 também está expressa em outros subtipos de carcinomas da tiróide, mas está ausente na maior parte das lesões benignas. Estes achados sugerem que o aumento da expressão do gene ARG2 pode estar associado à patogênese dos carcinomas da tiróide.Apesar de ser identificado como um dos marcadores capaz de distinguir as lesões benignas das malignas, o papel da ARG2 na patogênese da tiróide e o mecanismo de sua ativação são desconhecidos. A ARG2 participa da via da uréia e compete com a Óxido Nítrico Sintase (NOS) pelo mesmo substrato, a L-arginina. Têm-se sugerido, em outros modelos, que a ARG2 esteja relacionado à via de progressão tumoral, enquanto que a NOS, uma enzima que utiliza a L-arginina como substrato e produz L-citrulina e NO, possa estar associada ao processo de apoptose celular ou ainda à patogênese tumoral.Este trabalho tem como objetivo investigar o papel da ARG2 nos carcinomas da tiróide humana. Uma vez que existe uma interação entre as vias da ARG2 e da NOS, ambos participam do metabolismo da L-arginina para produção de uréia e L-ornitina ou NO, investigaremos neste modelo a modulação da expressão das diferentes isoformas da NOS: nNOS (NOS neuronal), iNOS (NOS induzível) e eNOS (NOS endotelial). Como estratégia utilizaremos o siRNA (do inglês, small interfering RNA) para silenciamento do mRNA de ARG2. O silenciamento será realizado em linhagem de células de tumor folicular de tiróide humana (WRO) cuja expressão de ARGII foi identificada. Após verificar a eficência do silenciamento por análise da expressão da ARGII (PCR, Western blot) e atividade da ARG2, avaliaremos o efeito do bloqueio da ARGII na apoptose, viabilidade celular, produção de NO e na modulação da expressão de genes que participam da via ARGII-NOS e potencialmente modulados por estas vias como p21, VEGF, HIF-1. (AU)