Investigacao de elementos regulatorios do splicing alternativo do exon 14 do gene do retardo mental do x fragil (fmr1) e analise de expressao de suas isoformas

Resumo

Estima-se que 80% dos transcritos cerebrais de mamíferos sofram splicing alternativo, um mecanismo de regulação da expressão gênica que amplia a diversidade protéica. O gene do retardo mental do X frágil (FMR1) sofre splicing alternativo de quatro éxons gerando até 20 isoformas não redundantes da proteína do retardo mental do X frágil (FMRP). Pouco se sabe sobre as funções dos segmentos da FMRP codificados por éxons que sofrem splicing alternativo. Além disto, uma classe de mutações no gene FMR1 levam ao aumento dos níveis de RNAm do FMR1 e diminuição relativa dos níveis da FMRP em pacientes com síndrome de tremor e ataxia associada ao X frágil (FXTAS). Estudos recentes levantaram a hipótese de disfunção do mecanismo de splicing na patogênese da FXTAS. Neste contexto, o entendimento do mecanismo de regulação do splicing do FMR1 é relevante não somente à análise de sua função, mas também ao delineamento dos mecanismos patogenéticos da FXTAS. Este projeto tem como objetivos a identificação de elementos regulatóríos do splicing do éxon 14 do gene FMR1 e a análise de expressão de transcritos do FMR1 sem o éxon 14. A busca por elementos reguladores do splicing do éxon 14 se baseará na avaliação da expressão de mini-genes de segmentos genômicos do gene Fmr1 de rato por RT-PCR após transfecção. RT-PCR em tempo real será utilizado para análises da expressão do éxon 14 no sistema nervoso central de ratos. Os efeitos da exclusão do éxon 14, que muda o quadro de leitura dos transcritos do FMR1, serão avaliados sobre a proteína, pelo desenvolvimento de um anticorpo dirigido à nova região C-terminal da FMRP. (AU)