Análise das vias da "unfolded protein response" (upr) na regulação da expressão do glut4 em células musculares tratadas com palmitato.

Resumo

O excesso de ácidos graxos saturados tem sido relatado como uma condição que predispõe à inflamação crônica e estresse oxidativo, eventos estes que tem papel crucial no desencadeamento da resistência a insulina (RI) e do diabetes Mellitus do tipo 2 (DMT2). Essa resposta inflamatória aumentada pode causar uma perturbação no lúmem do retículo endoplasmático (RE) gerando o estresse de RE. Este estresse do RE resulta na ativação de vias celulares que compreendem uma resposta celular conhecida como Unfolded Protein Response (UPR). Estudos atuais têm demonstrado uma ativação do fator de transcrição NF-kB por meio das vias da UPR. Sabe-se que o NF-kB atua na transcrição de citocinas pró-inflamatórias, que por sua vez, estão relacionadas a prejuízos na via de sinalização insulínica e diminuição da translocação dos transportadores de glicose GLUT4. Além disso, o próprio NF-kB tem efeito negativo sobre a expressão do transportador de glicose GLUT4, diminuindo sua transcrição. Embora a participação das respostas ao estresse de RE na geração de resistência a insulina estejam bem estabelecidas, ainda pouco se sabe a respeito da importância de cada via específica sobre a expressão da proteína transportadora de glicose GLUT4. Dentro deste contexto, o presente projeto tem como objetivo investigar o mecanismo pelo qual a UPR regula a ativação do NF-kB e conseqüentemente a expressão do GLUT4 em células musculares da linhagem L6 tratadas com ácido palmítico. Para isto, serão realizadas curvas tempo-resposta e dose-resposta onde as células L6 serão tratadas com palmitato e a expressão da proteína GLUT4 será analisada. Posteriormente as células musculares serão submetidas a outros tratamentos com drogas inibidoras das vias da UPR (Salubrinal) e drogas que atuam sobre NF-kB (Cardamonin). Por fim, será realizado a imunoprecipitação dos fatores de transcrição ligados a cromatina (NF-kB p50) para identificar seqüências específicas de DNA, que estão ligadas à proteína GLUT4.