Estudo dos efeitos endocrinos e paracrinos na administracao de dna plasmidial em modelos animais de terapia genica

Resumo

Nosso grupo de pesquisa tem recentemente utilizado uma administração direta "in vivo" de DNA plasmidial no músculo quadríceps de camundongos anões (lit/lit) e anões imunodeficientes (lit/scid). A princípio esta estratégia tinha a finalidade de realizar uma comparação com um modelo de terapia gênica cutânea ex vivo, baseado na transdução, mediante vetores retrovirais, de queratinócitos humanos primários para serem implantados em camundongos lit/scid, onde investimos esforços substanciais. No nosso caso específico, foram utilizados os genes do hormônio de crescimento humano (hGH) e de camundongo (mGH) para a transdução dos queratinócitos, os quais apresentaram níveis elevados e estáveis de expressão in vitro, mas foram detectados na circulação dos animais por um máximo de 12 dias. Quando foi realizada a administração intramuscular de um plasmídeo contendo o gene do hGH seguida de eletroporação, foram obtidos pela primeira vez níveis circulatórios de 1,5 a 3,0 ng hGH/ml durante 60 dias. Foi também obtido um aumento de peso altamente significativo de 33,1% para o grupo de lit/scid tratado, comparado a uma queda de peso de 4,2% no grupo controle. A partir destes resultados iniciais bastante promissores, nós pretendemos agora estudar mais profundamente os efeitos endócrinos e parácrinos do hGH após a administração de DNA plasmidial em nossos modelos animais, analisando outros parâmetros, tais como: peso do músculo tratado e não tratado, peso de outros órgãos (fígado, rins, coração, baço), comprimento dos animais, determinação de mIGF-I e de glicose. Outras comparações de promotores e seqüências gênicas (DNA genômico ou complementar) também serão realizadas, além de um estudo similar em camundongos anões imunocompetentes (lit/lit) com a injeção do DNA do mGH. Nós acreditamos que este trabalho, realizado em colaboração com a Unidade de Endocrinologia Genética da FMUSP, será de grande valia para o planejamento futuro de protocolos pré-clínicos e clínicos de terapia gênica, baseada em administração de DNA, para pacientes com deficiência de GH (GHD). (AU)