Caracterização de amostras de Escherichia coli do sorotipo O119:H6 que co-expressam os padrões de adesão localizada e agregativa e produzem biofilme

Resumo

Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) foi um importante agente de diarreia em crianças no primeiro ano de vida, em nosso meio, por várias décadas. EPEC provoca a chamada lesão Attaching and Effacing (A/E) em células intestinais e é portadora do plasmídio EAF (pEAF), que codifica a fímbria Bundle-forming Pilus (BFP). Esta fímbria medeia a formação de microcolônias compactas que caracterizam o padrão de Adesão Localizada (AL), em células HeLa e HEp-2. E. coli enteroagregativa (EAEC), outro patotipo diarreiogênico de E. coli bastante frequente em nosso meio, caracteriza-se pela formação do padrão de Adesão Agregativa (AA), em células HeLa e HEp-2, e produção de biofilme. A identificação da expressão de AL e AA contribui para a classificação de amostras de E. coli como EPEC ou EAEC, respectivamente. No Brasil, por várias décadas, amostras de EPEC do sorotipo O119:H6 foram isoladas com alta frequência, sempre produzindo o padrão AL típico. Curiosamente, em estudos epidemiológicos mais recentes, nosso grupo isolou amostras de E. coli O119:H6 que co-expressam AL e AA (AL/AA) e produzem biofilme. Em nossos estudos do mestrado, sequenciamos o gene bfpA (que codifica a sub-unidade estrutural de BFP) de uma dessas amostras (EC404/03), o qual apresentou identidade de 99,9% com a sequencia de bfpA de uma amostra protótipo O119:H6 produtora de AL. Construímos, então, um mutante isogênico em bfpA que perdeu a capacidade de produzir AL. A seguir, transferimos, por conjugação, um plasmídio de alto peso molecular (desprovido de bfpA) da EC404/03 para E. coli não aderente. Uma caracterização preliminar dos transconjugantes resultantes revelou a produção de AA e a ocorrência de um plasmídio distinto de pEAF. Para compreender potenciais alterações sofridas por amostras de EPEC O119:H6, com relação ao padrão de adesão, pretendemos ampliar nossos estudos, caracterizando e comparando diferentes propriedades fenotípicas e genotípicas da EC404/03 com outras 2 amostras O119:H6 AL/AA bem como compará-las com as características de amostras do mesmo sorotipo, apresentando apenas AL. Pretendemos ainda obter novos transconjugantes com as outras duas outras amostras AL/AA, na tentativa de identificar se haveria um plasmídio comum associado com o padrão AA e formação de biofilme nas amostras O119:H6 AL/AA. Usando microscopia confocal, pretendemos também comparar a espessura e a distribuição das células bacterianas no biofilme formado, em superfícies biótica e abiótica, pelas amostras EC404/03, seu mutante em bfpA (obtido no mestrado), e transconjugantes. Os resultados serão analisados em combinação na tentativa de se avaliar a eventual ocorrência de relação evolutiva entre as amostras O119:H6 AL e AL/AA, por aquisição horizontal de plasmídio contendo genes que conferem AA. (AU)